1. 高浓度基底膜基质用于哪些实验？低生长因子基底膜基质用于哪些实验？标准款基底膜基质 用于哪些实验

高浓度基底膜基质可适用于体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同 时可使 基底膜基质注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因 子的原位保持，便于用于原位分析和/或以后的切除。

低生长因子一般是用来需要自己添加生长因子的类器官，特别是用干细胞分化的类器官； 标准款的主要是做肿瘤类器官，也能做成血管实验。

2.如何将基底膜基质用于 3D 培养？怎样制作 3D 胶？需要将细胞嵌入到 基底膜基质中 吗？

高浓度基底膜基质可适用于体内应用研究，如制备厚层包被用于 3D 细胞培养。 细胞可以嵌在 基底膜基质中或者接种在 基底膜基质表面 (覆盖法) 。

3.使用基底膜基质时，需要将移液器吸头和离心管预冷吗？

是的。因为 基底膜基质在高于 10℃的条件下即会开始成胶，我们推荐操作基底膜基质时 使用预冷的移液管、吸头和离心管。

4. 基底膜基质会快速聚合吗？

基底膜基质在 10℃至 35℃时会快速聚合成胶。

5.什么情况下，需要使用无酚红基底膜基质？

对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红 基底膜基质，如使用荧光染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红基底膜基质。

此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内 分泌和荷尔蒙代谢的能力。

6.如何从基底膜基质中收获细胞？

推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在 基底膜基质中的细胞。中性蛋白酶 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或 细胞表面蛋白 。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用中性蛋白酶不会产生损 伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。

对于代谢研究和 RNA 抽提，建议在 4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收集。因为 基底膜基质中含有痕量的 RNA ，进行 RNA 分析时，应设一个 基底膜基质 (不接种细胞) 的对 照组。其它从 基底膜基质中收获细胞的方法： 降低温度至 4℃-6℃使 基底膜基质解聚，需要 一定的时间并且仅适合一部分应用。

7. 基底膜基质包被过的培养皿可以储存多长时间呢？

包被过的培养皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下，可在 37°C 培养箱中最多存放 7 天。保存时 基底膜基质表面需要使用无血清培养基均匀覆盖，保持湿润。

8.哪些情况下应该选用薄胶？什么时候用厚胶呢？3D 培养有哪些应用？

薄胶主要用于辅助细胞贴壁，有利于细胞增殖。如原代细胞培养，需要一层薄薄的蛋白层 辅助，就可以选用薄胶；厚胶主要用于 3D 细胞培养，如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构 (RingAssay) ， 以及进行细胞侵袭实验等；3D 细胞培养实验，主要是用于研究细 胞与细胞间的相互作用以及复杂结构，如生物组织等。

9.进行内皮管形成实验，应该选用多大浓度的 基底膜基质呢？

进行该实验，  基底膜基质最低浓度应不低于 10mg/mL。

10. 基底膜基质的最低成胶浓度是多少？

不同的实验目的需要不同的 基底膜基质浓度，用户应该根据具体的实验需求确定。  基底 膜基质最低成胶浓度为 7mg/mL 。稀释时不要简单进行体积倍比稀释，不同批次间的 基底 膜基质浓度有差异，应该根据最终工作浓度(mg/mL)算出需要加入的稀释液体 (如 PBS 或 无血清培养基) 的量。用于体内研究的 基底膜基质，为了避免成胶不完全，最终工作浓度 不应低于 10mg/mL。

11. 基底膜基质胶块在体内可以维持多长时间？

基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。

12.怎样稀释基底膜基质?

使用冰上预冷的无血清培养基或者 PH7.4 的 PBS。

13.应该如何对基底膜基质移液操作?

推荐使用预冷的移液器或者注射器操作，移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底 部；分液时切忌过快、用力过猛。如果使用移液管 (Pipets ) ，需要分液 5mL 时，应该吸取 6mL ，分液到移液管内仍有 1mL 时即停止；如果使用自动移液器 (Pipetman ) ，按压到 第二档位吸液，然后按压到第一档位进行分液。

14.为什么我的基底膜基质很粘稠？

基质胶的蛋白浓度越高，胶体越粘稠。如果浓度高于 13.0mg/mL ，基质胶会显得非常厚重。 基底膜基质基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度 基底膜基质不稀释也可以 直接使用，如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子，注射于小鼠体内后，细胞可以保持原 位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀释后，按照标准浓度的 基底膜基质产品使用方 法使用，具体稀释浓度根据实验需求确定。

除因为产品本身浓度高而粘稠外，基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有 关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏 基底膜基质的冰箱带有自动除霜功能， 冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶成胶。所以，切忌将 基底膜基质储藏于此类冰箱中。 为保证 基底膜基质的使用效果，冻融次数应该尽可能减少。拿到新的 基底膜基质后，请 按照单次用量进行分装。每次融化操作，  基底膜基质都应该放置于冰上。

15.为什么基底膜基质在 37°C 成胶，而在 4°C 时却呈液体状态？

基底膜基质是一种从小鼠肿瘤中提取的重组基底膜，新鲜提取的原料中主要包括以下成 分：层粘连蛋白，IV 型胶原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰岛素生长因子及其 他生长因子。这些蛋白构成了 基底膜基质的基本结构。在 22℃-37℃温度条件下，大分子 间的共价键可以结合，促使 基底膜基质形成凝胶。而在低温条件 (如4℃) 下， 由于没有 足够的能量促使共价键结合，所以 基底膜基质呈现液体状态。