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  • Hypoxanthine 次黄嘌呤(货号:H9377)
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    CAS:68-94-0
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CAS:
CAS:68-94-0

产品货号:H9377-1

储存条件:4℃干燥避光保存

产品描述

生化试剂,制备生物培养基,例如HAT选择性培养基的制备。

产品性质

英文别名(English synonym)

HypoxanthineG

CAS号(CAS NO.)

68-94-0

分子式(Formula)

C5H4N4O

分子量(Molecular Weight)

136.1

外观(Appearance)

无色针状结晶


原理:

在单抗制备中,由于需要进行选择性杀死非目标细胞,所以使用添加HAT的选择性培养基,其依据是细胞中的DNA合成有两条途径:一条途径是生物合成途径(“D途径”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程,而HAT培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径(“S途径”),它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可。因此,在HAT培养液中,未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基蝶呤阻断,虽“S途径”正常,但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言,由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型(HGPRT)细胞,因此自身没有“S途径”,且“D途径”又被氨基蝶呤阻断,所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞,既具有效应B细胞的“S途径”,又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性,因此能在HAT培养液中选择性存活下来,并不断增殖。通常HAT中,H(次黄嘌呤)的浓度为1×10-4M,A(氨基蝶呤)为4×10-7M,T(胸腺嘧啶)为1.6×10-5M,在HT培养基中,只需要不加氨基蝶呤,其它都同HAT。

HAT培养基的配制:

100×A(氨基喋呤)贮存液:称取1.76mg氨基喋呤溶于90ml超纯水中,滴加1mol/L的NaOH 0.5ml助溶,待完全溶解后,加1mol/L HCL 0.5ml 中和,再补加超纯水到100ml。0.22um膜过滤除菌,小量分装,-20℃保存。 

100×HT贮存液:称取136.1mg次黄嘌呤和38.8mg胸腺嘧啶核苷,加超纯水到100ml,置45-50℃水浴中使完全溶解,0.22μm膜过滤除菌,小量分装,-20℃保存,临用前37℃水浴中溶解。

HT培养基:82ml基础培养基中加入1ml HT(100×),1ml SP(100×),15ml灭能的犊牛血清。

HAT培养基:99ml HT培养基加入1ml A(100×)。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本品仅用于实验研究。

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