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  • Bradford蛋白定量试剂盒(货号:B5105)
  • Bradford蛋白定量试剂盒(货号:B5105)

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CAS:
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货号:B5105

存储条件:Bradford蛋白浓度测定试剂4ºC保存。蛋白标准-20ºC保存。保质期为1年。

 

一、背景

Bradford蛋白浓度测定法是基于考马斯亮蓝G250的生物化学特性,其在酸性条件下呈棕红色,最大吸收波长为465nm。当它与蛋白质结合后,变为蓝色,最大吸收波长为595nm。在一定浓度范围内,蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比。通过测定595nm处吸光度的增加量,可以确定与其结合的蛋白质量。蛋白质与考马斯亮蓝结合后,大约在2-5分钟内达到平衡,反应速度快,结合物在室温下可保持稳定至少1小时。

 

二、产品描述及应用

本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒是一种高效、稳定且高灵敏度的蛋白浓度测定产品,在传统的Bradford法的基础上,我们的试剂盒经过特殊优化,具有以下优势:

1. 快速检测:仅需不到10分钟即可完成10-20个样品的测定,大大缩短了检测时间,提高工作效率。

2. 高灵敏度:最小蛋白检测量可达到0.5μg,能够精确测定低浓度的蛋白样品。

3. 良好的线性关系:我们的试剂盒经过精心优化,确保5μl体积的蛋白样品或标准品在0.1-1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系,从而保证测定数据的准确性和可靠性。(见图1)

 

图1:BSA蛋白标准品使用本试剂盒的标准曲线图。

 

此外,与其他蛋白浓度测定方法如BCA法和Lowry相比,Bradford法不受绝大部分样品中的化学物质影响,特别是还原试剂的影响,如β-巯基乙醇和二硫苏糖醇。需注意的是,我们的试剂盒对去垢剂的浓度有一定限制,建议确保待测蛋白样品SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween20、Tween60、Tween80低于0.02%。对于含有高浓度去垢剂的样品,推荐使用我们另外一款产品——Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)。

 

三、包装清单

Bradford蛋白浓度测定试剂

250ml

蛋白标准(5mg/ml BSA)

1.5ml

说明书

1份

四、注意事项

1. 请在操作前阅读整个使用说明书,并按照说明进行操作。

2. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

3. Bradford蛋白浓度测定试剂从4ºC冰箱取出后请回复到室温再使用。

4. 实验前确保有可检测560-610nm之间波长的酶标仪,最佳检测波长为595nm。

5. 实验前确保有平底96孔酶标板。

6. 试剂盒中的试剂可能对皮肤和眼睛有刺激性,请佩戴适当的个人防护装备(如手套、护目镜)。

7. 所有试剂都应按照实验室的安全操作规程处理。

8. 请勿将试剂或试剂盒的任何部分用于其他目的,以避免污染和交叉反应。

 

五、实验步骤

1. 蛋白标准品的配置:

根据实验需求配置BSA梯度蛋白标准品。推荐使用待测蛋白的溶解缓冲液,或者使用PBS溶解BSA标准品。以下是一种配置参考,用户可以根据实验需求更改为不同稀释方法和不同浓度:

样品体积

A

B

C

D

E

F

G

5mg/ml BSA(μL)

0

5

10

20

30

40

60

缓冲液(μL)

200

195

190

180

170

160

140

终浓度(mg/ml)

0

0.125

0.25

0.5

0.75

1

1.5

2. 蛋白浓度测定:

1) 将各浓度标准品和待测样品分别取5μL加入微孔板中。

2) 在每个孔中加入250μL Bradford蛋白浓度测定试剂,并振荡30秒以充分混合。盖上微孔板,在室温下孵育10分钟。

3) 使用酶标仪测定595nm处的吸光度。也可以在其他575-615nm波长范围内测定吸光度,但相对于595nm,吸光度可能会损失0-10%。

4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值作为最终读数),绘制标准曲线(X轴为蛋白浓度;Y轴为最终的OD595nm)。根据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品的蛋白浓度。

 


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