货号：PMM025
存储条件：-20°C保存。MYC-Magnetic beads经常使用可在4℃保存，在-20或-80℃长期保存，避免反复冻融。
试剂盒组分：
货号 | 名称 | 规格 |
MNM-25-1000/MNA-50-2000 | MYC-Nanoab-Magnetic | 1000ul(25T)/2000ul(50T) |
IP001A | 裂解液A | 30ml |
IP001B | 裂解液B | 30ml |
IP001C | 漂洗液C | 30ml |
IP001D | 漂洗液D | 30ml |
IP001E | 洗脱液E | 3x1ml |
CLJ0615 | 磁力架1.5ml，6孔 | 个 |
产品简介：
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的；纳米抗体由传统抗体的重链可变区（VHH）组成，具有分子量小、亲和力高、特异性强，且耐酸碱高温环境等特点；基于纳米抗体的优点，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象，并且节省实验时间。
实验步骤：
提示：尽量在4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。
1.植物组织裂解处理：
取适量植物组织样本（叶片等）放置于冷冻液氮中，之后将冷冻后得植物组织样本放于研钵进行研磨，尽可能充分研磨破坏其细胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B（需加入PMSF溶液）进行裂解，为了提高裂解效率，可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g离心力充分震荡 30min，裂解完成后 12000 rpm，离心30min，吸取上清置于新的离心管中，弃去沉淀。（进行第3步）
2. 动物细胞裂解
2.1 收集细胞：
根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个细胞。
2.2 裂解细胞：
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。
3. 平衡珠子：
振荡充分混匀珠子，吸取40μl MYC-Nanoab-Magnetic beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态，丢弃上清液。（此步骤可选）
3. 结合蛋白：将平衡好的beads（如果未做第 4 步，可在细胞裂解产物中直接加入40μl slurry）加入到细胞裂解产物中，于4℃旋转混合结合30min-1h。在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态，丢弃上清液。
5. 清洗珠子：
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，利用磁性分离，丢弃上清液。
用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads，4℃，在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态，丢弃上清液并重复洗涤 2 次。（可选：在第二次洗涤的步骤中增加盐浓度到 500 mM）。
6. 洗脱蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃，加热10min充分变性，MYC-Nanoab-Magnetic Beads 可在磁力架上进行分离，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二：
加入溶液E 50ul 洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，利用磁性分离收集上清，为了中和酸性的甘氨酸，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
注意事项：
1、关于裂解液与裂解液的选择：
裂解液A为温和裂解液，裂解液B为强裂解液，请根据自己实验样本选择相应的裂解液，如：若为胞质蛋白可选裂解液A或者A与B混合使用，若为核蛋白则可选择裂解液B。
漂洗液C和漂洗液D的选择：（裂解液D为高盐溶液，可能会破坏蛋白间较弱的相互作用），若两个蛋白相互作用强，同时还想减少非特异性结合，可选D；若两个蛋白相互作用弱的优先C。
2、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
