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产品:RIPA 中 100ML

产品信息


产品名称:

RIPA 中 (货号:R1090-100ML)

产品规格:

100ML

销售价格:

¥360.00 / 100ML

产品其他说明


                     RIPA裂解液(中) 

 

货号:R1090-100ml

保存条件:-20℃。

产品简介:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,odium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

注意事项:     

1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 

使用说明: 

对于培养细胞样品:  

1.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2.对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

3.对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

4.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 

裂解液用量说明:

通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品:

1.把组织剪切成细小的碎片。

2.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高

浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4.用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6.如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 

相关产品 

BCA蛋白定量试剂盒   货号B5000

产品编号

W0013

R1090

R1091

产品名称

Western 及 IP 细胞裂解液

RIPA 裂解液(中)

RIPA 裂解液(强)

有效裂解成分

1% Triton X-100

1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS

1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS

裂解强度

温和

对膜蛋白的提取

一般

较好

很好

对胞浆蛋白的提取

很好

很好

很好

对核蛋白的提取

较好

较好

很好

胞浆磷酸化蛋白提取

很好

很好

很好

细胞核转录因子提取

很好

很好

很好

含蛋白酶抑制剂

含磷酸酯酶抑制剂

不同物种样品兼容性

主要用途

WB, IP,co-IP

WB, IP

WB, IP


注意事项:

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本品仅用于实验研究。


暂无FAQs

暂无COA

暂无相关文献

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LABLEAD
北京兰博利德商贸有限公司(LABLEAD)公司,成立于2007年。 专业从事生命科学方面的服务,为客户提供试剂、耗材、仪器等产品,主要涵盖生物化学、分子生物学、细胞生物学、微生物学、植物学、免疫学、免疫诊断、分子诊断等领域。

 

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