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产品:MYC-Nanoab-MAG 25T

产品信息


产品名称:

MYC-Nanoab-MAG (货号:MNM-25-1000)

产品规格:

25T

销售价格:

¥3,735.00 / 25T

产品其他说明

                 MYC-Nanoab-Magnetic Beads


货号:MNM-25-1000

储存条件:可在4℃保存1年(确保完全密封),避免离心,干燥和冻融。

产品描述

偶联anti-Myc-tag纳米抗体的磁性纳米微球用于免疫沉淀Myc-tag (EQKLISEEDL)融合蛋白。

产品优势

l没有普通抗体的轻链和重链,背景干净

l即用型,节约时间

l亲和力,高载量

应用范围

可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(ChIP)/RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性测定、质谱分析等。

特异性

特异性结合位于融合蛋白N-端、C-端及内部的Myc-tag。不结合内源性c-Myc。

产品特性

存储缓冲液:PBS(含有20%乙醇)。

保存条件:可在4℃保存1年(确保完全密封),避免离心,干燥和冻融。

实验原理


实验步骤

收集细胞
每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个表达Myc-tag融合蛋白的细胞,可根据Myc-tag融合蛋白表达量适当调整细胞数。

吸出培养基,向培养皿中加入预冷的1×PBS,漂洗2次,利用细胞刮或胰酶消化收集贴壁细胞,细胞转移到离心管,500g离心3分钟并丢弃上清液。

细胞裂解
1.在裂解缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,用500μl预冷的裂解缓冲液重悬细胞。

2.置于冰上30分钟,可每10分钟充分吹打一次。

3.4℃,20,000g离心15分钟,将裂解产物(上清)转移到一个新的预冷管中,丢弃沉淀。注意:此时细胞裂解产物可长期保存于-80℃。

平衡珠子

4.充分混匀Myc-Nanoab-Magnetic Beads,吸取40μl该产品到500μl预冷的裂解缓冲液中,在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液。(此步骤可选)

结合蛋白

5.将平衡好的Myc-Nanoab-Magnetic Beads加入到细胞裂解产物中(如果未做第4步,可在细胞裂解产物中直接加入40μl该产品),于4℃旋转混合结合1小时。根据实验需要可调整结合时间。如果需要,留存50μl的裂解产物进行免疫印迹分析。

6.在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液。如果需要,留存50μl上清液进行免疫印迹分析。

清洗珠子

7.500μl预冷的裂解缓冲液中重悬6中的Myc-Nanoab-Magnetic Beads,在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液并重复清洗3次。尽量减少清洗时间。

洗脱蛋白

方法一:
8.加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬Myc-Nanoab-Magnetic Beads。95℃,加热10min充分变性,在磁力架上进行分离,收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。

方法二:
9.加入50μl 0.2 M pH2.5的甘氨酸洗脱结合的蛋白,孵育时间30秒,期间不断混匀,在磁力架上进行分离并收集上清,立即加入5μl 1.0 M Tris(pH10.4)以中和酸性的甘氨酸。注意:为了提高洗脱效率可以重复这一步。

方法三:

10.加入40µM Myc-peptide进行洗脱。

可选实验方案

方案一:
如需进行Myc融合酶的活性检测,无需洗脱,可以直接检测。
方案二:
如需进行染色质免疫沉淀(ChIP)实验,主要用于含有Myc融合蛋白的蛋白质/DNA相互作用的实验。染色质免疫沉淀一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,联反应的逆转,DNA的纯化以及DNA的鉴定。其中前期细胞固定,染色质断裂不变;然后接着直接进入说明书的第5步,加入细胞裂解产物后,DNA-蛋白质复合物结合到Myc-Nanoab-Magnetic Beads上;
进入第6和7步,分离得到复合物;进入第9步,得到洗脱的复合物;后期交联反应的逆转,DNA的纯化及DNA的鉴定等同于普通的ChIP实验。RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验步骤同上。
方案三:
Myc-Nanoab-Magnetic Beads不仅可以用于在体内外检测和验证蛋白质之间的相互作用,也可以结合质谱分析筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。其操作步骤同免疫沉淀法,得到洗脱的复合物后,然后进行SDS–PAGE分析,用考马斯亮蓝或者银染的方法染色后,切下未知蛋白的条带,用质谱技术鉴定未知蛋白。

                   

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暂无COA

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北京兰博利德商贸有限公司(LABLEAD)公司,成立于2007年。 专业从事生命科学方面的服务,为客户提供试剂、耗材、仪器等产品,主要涵盖生物化学、分子生物学、细胞生物学、微生物学、植物学、免疫学、免疫诊断、分子诊断等领域。

 

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