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产品:蛋白酶抑制剂Cocktail (不含EDTA,片剂) 50pcs

产品信息


产品名称:

蛋白酶抑制剂Cocktail (不含EDTA,片剂) (货号:C0100-50pcs)

产品规格:

50pcs 10pcs

销售价格:

¥2,450.00 / 50pcs

产品其他说明

                             蛋白酶抑制剂 Cocktail  (不含 EDTA, mini 片剂)



产品货号:C0100

储存条件:存于 4°C,有效期 2 年。

产品描述

内源蛋白的产生和降解一般都维持在一个平衡状态,因此在稳定的环 境因素下细胞内的蛋白含量是也是稳定的。但是在体外研究中, 蛋白 合成过程终止,而降解大大增强,从而影响蛋白得率。因此我们建议使 用多种小分子组成的抑制剂混合物来抑制蛋白酶的功能,阻止蛋白降 解情况的发生。通常来讲,蛋白酶抑制剂 Cocktail 应用于哺乳动物裂解液或组织提取液,用以增加蛋白稳定性。如果没有Cocktail 保护,样品中存在的蛋白酶将会降解包括磷酸化蛋白在内的全部蛋白。

SmartBuffers 蛋白酶抑制剂Cocktail 是含有5 种广谱蛋白酶抑制剂的混合物,能有效保护蛋白完整性。

蛋白酶抑制剂Cocktail (不含 EDTA, mini 片剂)  1 Tablet for 10mL

组分

靶点

类型

AEBSF

Serine proteases

Irreversible

Aprotinin

Serine proteases

Reversible

Bestatin

Aminopeptidases

Reversible

E-64

Cysteine proteases

Irreversible

Leupeptin

Serine and cysteine proteases

Reversible

实验方法

1)本产品适用于 Western Blot, Co-IP, pull-down, IF, IHC, kinase assay 等实验。

2)mini 片剂可直接加入到细胞裂解液中,1 片对应体积为 10 mL。

3)另一种用法是用 1 mL ddH2O 溶解 1 片 mini 片剂配成 10X 的贮液备用。

4)这种贮液在 4°C 可以放置 1 周以上,在-20°C 可以放置 4 周以上。

5)溶解时,简短地旋涡振荡可加速药片溶解。

注意事项

1)若想加快片剂在溶液中的溶解速度,可以简短地旋涡振荡。

2)某些 DUB 蛋白酶 (例如 ATAXIN-3)无法被常见的蛋白酶抑制剂抑制,例E-64,AEBSF,bestatin,leupeptin 和Aprotinin。(Reference: Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012).

问题解答

1、蛋白酶抑制剂Cocktail 能否超规定比例稀释使用?

建议:蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关,如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂Cocktail 采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果,使用时应按照规定比例稀释,这是此类产品的共性。但实际产品里,不同厂商的标示清楚程度不同,有些友商的对稀释操作描述不严谨,很容易产生可以稀释使用的误导,需要仔细辨读,以免影响实验结果。在部分实验室实际应用中,也存在对于已知蛋白的成熟操作流程中减量使用 cocktail 的情况,对于这类应用,SmartBuffers 可对照同类产品的相同比例稀释使用,可以保证保护效果。

2、片剂中的辅料是否会影响实验结果?

建议:为使额外组分的影响降至最低,SmartBuffers 蛋白酶抑制剂 Cocktail 片剂采用了优化的配方。此片剂溶解迅速,不产生气泡,溶解后完全澄清透明。它可以兼容各种生命科学实验,包括蛋白结晶和Co-IP 这样的高要求应用。

3、我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂cocktail,片剂还是溶液?

建议:在选择 cocktail 产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分, 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中,溶液型产品较片剂来说需要的加工步骤少,因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势,片剂能够在 4 度储存而不需要零下 20 度。我们推荐使用溶液型产品,价格更低,有效的抑制剂成分含量更高,便于直接分装。

4、为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail?

建议:蛋白酶抑制剂Cocktail 是低毒,全面的蛋白保护试剂,最大限度地保护蛋白,使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入,更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白,如信号通路蛋白、受体蛋白,采用 coIP,Pull-down 等方法获得样 品 。 对 于 这 些 微 量 的 珍 贵 样 品 , Cocktail 能取得最佳的保护效果,比单一的抑制剂(如PMSF)更为可靠。

5、用了 Cocktail,结果仍然不好是怎么回事?

建议:蛋白酶抑制剂Cocktail 作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁,提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白,Cocktail 都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况,需要谨慎检查实验步骤和方案设计,最大限度发挥 Cocktail 作用,减少导致蛋白降解的环节。例如,细胞处理前,先要将裂解体系完全准备好,预先加入 Cocktail 并混匀,将要破碎的细胞,收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中,给予蛋白全程保护。

6、实验中经常用PMSF 来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail 和它比有什么优势?

建议:PMSF 是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于 PMSF 在很多方面存在明显的缺点,逐步被保护效果更好,更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail 所取代。PMSF 的毒性较高,因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF 作为其替代品。AEBSF 的半致死量是2834mg/kg, 而 PMSF 是 200mg/kg,AEBSF 安全域值超过 PMSF 十四倍多,同时有着相当的抑制效果,对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF 更为迅速。PMSF 的另一个缺点是易降解失效,它在水溶液中的半衰期是 30min,在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂 Cocktail 不但保护更加全面,而且效果更加持久。


     


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北京兰博利德商贸有限公司(LABLEAD)公司,成立于2007年。 专业从事生命科学方面的服务,为客户提供试剂、耗材、仪器等产品,主要涵盖生物化学、分子生物学、细胞生物学、微生物学、植物学、免疫学、免疫诊断、分子诊断等领域。

 

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