400-6869-840   /   010-60608020
您好,欢迎访问北京兰博利德官网
二开
  • LabFD 内切酶 BspQI(货号:F3503S)
  • LabFD 内切酶 BspQI(货号:F3503S)

    -
    • ¥0.00
      ¥0.00
CAS:
-

产品货号:F3503

储存条件:-20℃ 

同裂酶:SapI, LguI, PciSI;(注: 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。)

产品组成

组分

规格

BspQI (10U/ul)

50ul

10× HN Buffer

1ml

产品简介

BspQI 属于 Type IIS 型限制酶,识别非回文序列,并在识别序列之外进行切割,常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应 Buffer

使 BspQI 最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。

建议反应条件

1× HN 缓冲液;50℃温育;参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

活性定义

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中,50℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量

质量控制

超长时间温育检测

最适反应温度下,将 10 U BspQI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时

酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下,使用 10 U BspQI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将酶切产物重新连接。

将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

DNase 残留检测

将 10 U BspQI 与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

ddH2O

up to 50ul

10× HN Buffer

5ul

底物 DNA

1ug

BspQI (10 U/μl)

1ul

Total

50ul

 a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则将会影响 BspQI 酶活性;

(2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

(3)50℃温育 50min-1h;

(4)80℃温育 20min 即可使酶失活,或者通过吸附柱或苯酚 / 氯仿纯化终止反应。

 2.注意事项

① 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%,避免酶中过多的甘油引起星号活性;

② 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同,反应体积越小,酶切反应抑制效应越强。

 

不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

10

1

1

1

1

0

0

7

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

无影响

无影响

无影响

无影响

400-6869-840
客服电话
010-6060-8020
联系电话
PRODUCT CENTER
产品中心

您好,欢迎访问北京兰博利德官网