货号：F5607s

储存条件：-20℃

同裂酶：AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

建议反应条件

1×LabFD™缓冲液；37℃温育；参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件：80℃温育20min。

质量控制

功能活性检测

最适反应温度下，在20ul反应体系中，1ul LabFD™ BstBI能够在15min内完全消化1ug  λDNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下，将1ul LabFD™ BstBI与1ug λDNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下，使用1ul LabFD™ BstBI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下，将1ul LabFD™ BstBI与1ug超螺旋质粒DNA共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

蓝白斑检测

将含有单一lacZα基因的载体以1ul LabFD™ BstBI消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和 X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于 LabFD™ 系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a注：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR具备一定的离子强度，10xLabFDTMbuffer加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

3) 37℃温育15min（质粒），或15~30min（PCR产物），或30~60min（基因组DNA）；

4) 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。