货号:F5607s
储存条件:-20℃
同裂酶:AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。
产品组成
组分 | 规格 |
LabFD™ BstBI | 100ul |
10×LabFD™ Buffer | 1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 1ml |
产品简介
LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的高保真限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
建议反应条件
1×LabFD™缓冲液;37℃温育;参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件:80℃温育20min。
最适反应温度下,在20ul反应体系中,1ul LabFD™ BstBI能够在15min内完全消化1ug λDNA。
最适反应温度下,将1ul LabFD™ BstBI与1ug超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测
将含有单一lacZα基因的载体以1ul LabFD™ BstBI消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和 X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于 LabFD™ 系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
质粒DNA | PCR产物 | 基因组DNA | |
ddH2O | 15ul | 16ul | 30ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2ul | 3ula | 5ul |
底物DNA | 2ul(up to 1ug) | 10ul(~0.2ug) | 10ul(5ug) |
LabFD™ BstBI | 1ul | 1ul | 5ul |
Total | 20ul | 30ul | 50ul |
a注:本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切,未纯化的PCR具备一定的离子强度,10xLabFDTMbuffer加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
3) 37℃温育15min(质粒),或15~30min(PCR产物),或30~60min(基因组DNA);
4) 80℃温育20min即可使酶失活,停止反应(可选)。
1) 每种快速内切酶的用量为1ul,并根据需要适当扩大反应体系;
2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3.适用于质粒的扩大反应体系
DNA | 1ug | 2ug | 3ug | 4ug | 5ug |
LabFDTM BstBI | 1ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
Total | 20ul | 20ul | 30ul | 40ul | 50ul |
注:如果总反应体系大于20ul,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同DNA中的酶切位点数量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
7 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 序列完全重叠 剪切受阻 | 无影响 | 无影响 |
在不同反应缓冲液中的活性
LabFD™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart®Buffer | Takara QuickCut™Buffer | |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
注:活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。