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  • 快速内切酶Esp3I(BsmBI)(货号:F1503S)
  • 快速内切酶Esp3I(BsmBI)(货号:F1503S)

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CAS:
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产品货号:F1503S 

储存条件:-20℃


同裂酶:BsmBI, BstGZ53I, Esp16I, Esp23I

注: 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性

产品组成

组分

规格

LabFD™ Esp3I

30ul

10×LabFD™ Buffer

1ml

10×LabFD™ Color Buffer

1ml

 

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA 等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度, 轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、连接试剂在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。

 建议反应条件

1×LabFD™缓冲液;37℃温育;参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。


功能活性检测

最适反应温度下,在 20ul 反应体系中,1ulLabFD™ Esp3I 能够在 15min 内完全消化 1ug λDNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下,将 1ul LabFD™ Esp3I 与 1ug λDNA 共同温育 3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下,使用 1ul LabFD™ Esp3I 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下,将 1ul LabFD™ Esp3I 与 1ug 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。

使用方法

 1. DNA 快速酶切流程

   (1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:


质粒 DNA

PCR 产物

基因组 DNA

ddH2O

15ul

16ul

30ul

10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer

2ul

3ula

5ul

底物 DNA

2ul(up to 1ug)

10ul(~0.2ug)

10ul(5ug)

LabFD™ Esp3I

1ul

1ul

5ul

Total

20ul

30ul

50ul

注:本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切,未纯化的 PCR 具备一定的离子强度,10xLabFDTMbuffer 加入量可适当减少至2ul。但由于DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR 产物进行纯化。

   (2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

(3)37℃温育 15min(质粒),或 15~30min(PCR 产物),或 30~60min(基因组 DNA);

(4)80℃温育 20min 即可使酶失活,停止反应(可选)。

 2. 双酶切或多酶切

 (1) 每种快速内切酶的用量为 1ul,并根据需要适当扩大反应体系;

 (2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;

(3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

 3. 适用于质粒的扩大反应体系

注:如果总反应体系大于 20ul,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

DNA

1ug

2ug

3ug

4ug

5ug

LabFDTM Esp3I

1ul

2ul

3ul

4ul

5ul

10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer

2ul

2ul

3ul

4ul

5ul

Total

20ul

20ul

30ul

40ul

50ul

 不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

pACYC184

M13mp18/19

Adeno2

2

0

1

1

1

0

0

1

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

序列完全重叠

剪切阻断

序列完全重叠

剪切阻断

无影响

序列重叠

剪切可能受阻

在不同反应缓冲液中的活性


LabFD™ Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart®Buffer

Takara QuickCut™Buffer

活性

100%

100%

100%

100%

注:活性数据来自LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。

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