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  • LabFD内切酶 SgeI(货号:F1501S)
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CAS:
-

产品货号:F1501S

储存条件:-20℃

SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列,一条链或双链甲基化均可被识别。

产品组成

组分

规格

LabFD™ Sgel

50ul

10×LabFD™ Buffer

1ml

10×LabFD™ Color Buffer

1ml

 

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA 等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度, 轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、连接试剂在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。

酶活定义

 1×SgeI Buffer 条件下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中37℃孵育1 h,不断增加酶量,直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为1 U。

质量控制

核酸内切酶残留检测

 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过DNA电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h,通过 DNA 电泳检测双链DNA 底物无变化。

注意事项

1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。

2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI

的非特异性酶切,因此建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。

使用方法

  1. DNA 酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:


质粒 DNA

PCR 产物

基因组 DNA

ddH2O

15ul

16ul

30ul

10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer

2ul

3ula

5ul

底物 DNA

2ul(up to 1ug)

10ul(~0.2ug)

10ul(5ug)

LabFD™ SgeI

1ul

1ul

5ul

Total

20ul

30ul

50ul

注:反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过 1 h。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

③ 37℃温育1 h;

④ 80℃温育 20 min即可使酶失活,停止反应(可选)。

   2.双酶切或多酶切

每种快速内切酶的用量为 1ul,并根据需要适当扩大反应体系;

所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;

如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注:如果总反应体系大于 20ul,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

DNA

1ug

2ug

3ug

4ug

5ug

LabFDTM Sgel

1ul

2ul

3ul

4ul

5ul

10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer

2ul

2ul

3ul

4ul

5ul

Total

20ul

20ul

30ul

40ul

50ul

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI 

无影响

总是切割被 Dcm甲基转移酶甲基化的DNA

切割与 CpG 甲基化序列重叠的靶点

无影响

无影响

 

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