产品货号：F1501S

储存条件：-20℃

SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列，一条链或双链甲基化均可被识别。

产品组成

产品简介

SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别^m5CNNG(9/13)^位点，并于37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能，该酶Storage Buffer中包含预混合BSA，其可增强酶的稳定性，并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。

酶活定义

在 1×LabFD™ Buffer 条件下，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm⁺) 在50μl 反应体系中37℃孵育1 h，不断增加酶量，直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为1 U。

质量控制

核酸内切酶残留检测

将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h，通过 DNA 电泳检测双链DNA 底物无变化。

注意事项

1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。

2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI 的非特异性酶切，因此建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。

使用方法

1. DNA 酶切流程

①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

注：反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过 1 h。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育1 h；

④ 80℃温育 20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。

甲基化修饰影响