货号：T2123

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产品组分：

产品简介：

Labfect5000是一款高性能通用型核酸转染试剂，适用于将质粒DNA转染入哺乳动物细胞。Labfect5000具有非常优异的转染性能，可转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞。在贴壁培养的AAV293细胞中，Labfect5000质粒DNA(EGFP质粒)的转染阳性率可高达90%以上，即使对于较难转染的RAW264.7细胞，Labfect5000的质粒转染阳性率也可高达70%。

Labfect5000转染试剂的特点 :

1. 卓越的细胞转染性能：配置有Trans Buffer，可完全替代无血清培养基，能有效提高质粒DNA转染效率，促进蛋白表达，可高效转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞等，在贴壁细胞中的转染阳性率可高达90%以上；

2. 对于很多较难转染的免疫细胞和神经细胞，如Raw264.7、Neuro-2a、BV2、SH-SY5Y等，能够获得较为理想的转染效果；

3. 极低的细胞毒性：使用可降解生物纳米材料研发而成，毒性极低，转染后细胞死亡率只有10%左右，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

4. 操作简便：无需在转染后4-6小时左右换液，不需要额外购买Opti-MEM，可以正常使用含血清培养基；

5. 极高的性价比优势：转染性能显著优于部分国际权威品牌而价格不足其30%

适用细胞系：

HeLa，Huh-7，CCD-14Br，SBC-1，A-172，NB-1，COS-7，293T，CV1, L cell，A431，NIH3T3，HEK293，CHO，KB，L929，A375M，ECV304，HepG2，BL6，panc-1，LTK-,C6，HOS，B16-F10，HT29，MCF-7，MaTu，F98,CC531，Jurkat，K-562，U937，IM-9，HUVEC, HUVSMC，HASMC，HAEC，A-10SMC，人肝细胞，原代大鼠肝细胞，鸡胚胎心肌细胞，Pc12，果蝇Kc细胞，CEM，F9，S194，HEL，A6，JEG等。

贴壁细胞转染方法步骤（以24孔板转染质粒DNA为例）:

A. 细胞接种:

1. 转染前一天将细胞铺板（使用不含抗生素的完全培养基），每孔1.5-2.0x10⁵个细胞左右，使转染时细胞密度为80%;

2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B. Lipofect5000/DNA复合物包装（该步完成后应立即进行转染）：

1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl Trans buffer，并添加适量的DNA（参见附表），用移液器轻轻混匀成DNA稀释液。 

2. 使用前混匀转染试剂，立即往DNA稀释液中添加适量的转染试剂，用移液器轻轻混匀。

3. 将Lipofect5000/DNA复合物室温静置15分钟后，立即转染。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C. 转染：

1. 将步骤B制备的复合物滴加至细胞培养孔中。轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。

2. 培养24小时后即可观察，但最佳观察时间为36小时。如果需要，细胞培养6~24小时后可以更换新鲜完全培养基，但不是必须。

3. 收获细胞，进行后续实验。对于稳定转染，在转染24~48小时后，用选择培养基传代培养。

附表 1 ：贴壁细胞培养体系推荐初始转染条件

注意：

1. 首次使用，建议进行细胞密度优化实验，如可在培养板中分别接种1.5x10⁵、2.0x10⁵、2.5x10⁵个细胞，分别进行DNA转染，

以选择出转染效果较好的细胞接种密度:

2. 应避免转染复合物中存在血清，因为血清会干扰转试剂与DNA形成复合物，在转染过程中不要向培养基中添加抗生素。

3. 本产品仅用于科学研究，不得用于医学临床用途。