货号：FH0201
储存温度：－20°C保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4°C
制品说明：
本产品包含Lab FastHF DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。 FastHF DNA Polymerase来自于基因工程改造的pfu，大大提高了扩增速度、保真性和产量。Lab FastHF PCR Master Mix是非长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用LabpO TOPO-Blunt平末端系列载体（货号PB0101、PB0102）克隆。
产品特点：
1. 扩增速度快：延伸速度可以达到2-4kb/min，是pfu的4-8倍。
2. 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-100%。
3. 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
4. 扩增长度指标和pfu一致，可以完全替代pfu进行快速高保真扩增，但不建议用于pfu无法扩增的长片段。以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。
建议PCR体系设置：
Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
2× Lab FastHF PCR MasterMix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议 PCR 循环条件：
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 95℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 95℃ | 10 seconds | 30 cycles |
Annealing | 55℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 15-30 seconds / kb | |
Final Extension | 72℃ | 2-5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意事项：
1. Lab FastHF DNA Polymerase扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用15-20 秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用30-45 秒/kb。
2. 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98℃。Lab FastHF DNA Polymerase耐热性强，98℃对Lab FastHF DNA Polymerase的活性无改变。
3. 如果扩增模板 GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入 DMSO 到终浓度1%-8%， 按照 1% 梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度 1.0-1.7 M。并采用降落 PCR（Touchdown PCR）
