产品货号：F5601S 

储存条件：-20℃

同裂酶：Alw44I, VneI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA 等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度， 轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

LabFD^TM  Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。 LabFD^TM  Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链DNA 片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp 双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

建议反应条件

1×LabFD™缓冲液；37℃温育；参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

功能活性检测

37℃下，在 20ul LabFD™ 反应体系中，1ul LabFD™ ApaLI 能够在15min内完全消化1ug λDNA(HindIII digest)。

超长时间温育检测

37℃下，将 1ul LabFD™ ApaLI 与 1ug λDNA(HindIII digest)共同温育 3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用 10 倍酶量的 LabFD™ ApaLI 消化 DNA 底物， 回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切 酶可以重新切开95%以上的连接产物。

非特异性内切酶活性检测

37℃下，在 20 μl 通用 LabFD™ 反应体系中将 1 μl LabFD™ ApaLI与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：本体系适用于经过纯化的PCR 产物酶切，未纯化的PCR 具备一定的离子强度，10xLabFDTMbuffer 加入量可适当减少至2ul。但由于DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR 产物进行纯化。

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）37℃温育 15min（质粒），或 15~30min（PCR 产物），或 30~60min（基因组 DNA）；

（4）80℃温育 20min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2.双酶切或多酶切

（1）每种快速内切酶的用量为 1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

（2）所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

（3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。