货号：F5585S

储存条件：-20℃

同裂酶：MalI

注： 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA的快速酶切。LabFD^™快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

建议反应条件

1×LabFD™缓冲液；37℃温育；参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育20min。

质量控制

功能活性检测

最适反应温度下，在20ul反应体系中，1ul LabFD™ DpnI能够在15min内完全消化1ug PUC19 DNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下，将1ul LabFD™ DpnI与1ug PUC19 DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，更长时间酶切可能出现星号活性。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下，在20ul通用反应体系中将1ul LabFD™ DpnI与1 μg超螺旋质粒DNA共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

使用方法

1.DNA快速酶切流程

①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

②轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③37℃温育15 min（质粒），或30~60 min（基因组 DNA）；

④80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）；

⑤如果使用 LabFD™ Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2.双酶切或多酶切

①每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

②所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

③如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

4.适用于PCR产物中消化质粒模板

将1 ul LabFD^TM DpnI加入50ul PCR产物中混匀，37℃温育60min，80℃温育20min热失活，得到的产物可用于下游转化实验。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。