货号：d5027
存储温度：-20°C
产品组分
组分/规格 | d5027 |
dsDNase(1 rxn/μl) | 50μl |
10× dsDNase Buffer | 200μl |
产品简介
dsDNase 是一种核酸内切酶，能够裂解 DNA 中的磷酸二酯键，生成带有 5'- 磷酸和 3'- 羟基末端的寡核苷酸。dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA（double-stranded DNA, dsDNA）而不会消化单链DNA、引物、探针和 RNA。dsDNase 具有热敏感性，可在 55℃条件下快速失活。dsDNase 主要用于反转录实验前快速去除 RNA 样本中的基因组 DNA 污染，与传统的使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染的方法相比，无需额外加入 EDTA 失活，可减少对 RNA 的损伤，同时节省实验时间，保证 RNA 水平定量的准确性。
活性定义
根据 Kunitz 实验方法，在 25℃ pH 5.0 的条件下，以过量的大分子 DNA 为底物，在 260 nm 波长处每分钟能引起吸光度增加 0.001 的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
储存缓冲液
25 mM Tris-HCl (pH7.5，@25℃ ), 2.0 mM MgCl2, 10 mM NaCl,
0.01%(v/v)TritonX-100, 50%(v/v) glycerol。
抑制与失活
抑制条件：金属离子、EDTA、SDS、DTT、β-巯基乙醇、高盐离子浓度等会抑制 dsDNase 的活性；
失活条件：55℃温育 5 min。
质量控制
蛋白质纯度
通过SDS-PAGE并考马斯亮蓝染色，该酶纯度≥90%。
RNA 酶活性检测
将酶液与 RNA 底物 在 37 温育 1 h，通过凝胶电泳检测没有发现RNA 底物降解。
功能检测
该产品被用于测试去除来自 RNA 样本中的基因组 DNA 并进行了RT-qPCR 扩增，发现去除率 ≥99.9%。RNA 数量不受 dsDNase 处理的影响。
实验步骤
1、于冰上配制如下反应体系
试剂 | 使用量 |
dsDNase | 1μl |
10× dsDNase Buffer | 1μl |
模板RNA | Xμl |
总RNA | 1 pg~5 μg/10 μl |
mRNA | 0.1 pg~500 ng/10 μl |
特异性 RNA | 0.01 ng~500 ng/10 μ |
Nuclease-Free Water | To 10μl |
2. 轻轻吹打混匀反应体系后，将以上混合液在 37℃温育 2~5 min；
3. 65℃热失活 2 min，迅速将获得的 RNA 置于冰上，用于后续实验。长期保存请置于 -80℃，避免反复冻融。
注意事项：
1.若 RNA 样本下游用于 RT-PCR，且目的基因长度 ≥3 kb，失活步骤前需添加终浓度为 10mM 的 DTT；
2.为避免 RNA 降解，可在反应体系中加入适量的 RNase Inhibitor。
说明书下载
