产品货号:D2215
存储温度:4℃避光干燥,有效期2年
产品简介
DCFH-DA(也称为2',7'-二氯二氟荧光素二乙酸酯)通过细胞酯酶水解为2',7'-二氯二氢荧光素(也称为2',7'-二氯荧光素),然后氧化为2 ',7'-二氯荧光素主要通过H2O2生成。 DCFH-DA在细胞内氧化应激过程中可能对多种氧化反应具有反应性。该探针被广泛用于监测细胞的氧化还原过程。
以下过程提供了一般指南,应针对您的具体情况进行修改。
实验操作
1.配置1-10 mM DMSO储备溶液。未使用的DMSO储备溶液应分装到一次性小瓶中,并在-20°C下保存。避开光线。
2.在生理缓冲液(如PBS,HBSS,HEPES)中使染料的工作浓度为1–10μM。您的应用的最佳工作浓度必须根据经验确定。
3.从生长培养基中去除细胞,将染料工作溶液(来自步骤2)添加到细胞中,并在室温或37℃下孵育细胞5至60分钟。
4.去除染料工作液;用预热的HBSS洗涤,然后添加预热的HBSS或增长培养基,并在最佳温度下孵育。最佳恢复时间可能相差很大,因为某些细胞类型通常显示出低水平的酯酶活性。
5.在将细胞暴露于实验诱导之前确定载样细胞的基线荧光强度。
6.阴性对照应评估如下:
6.1检查未染色的细胞在绿色发射范围内的自发荧光。
6.2对于流式细胞仪,确定在上染和处理后,细胞的前向和侧向散射没有改变。细胞尺寸的变化可能与处理或毒性反应引起的起泡或收缩有关。
6.3检查有无诱导剂的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物的荧光。在不存在细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下,荧光随时间的逐渐增加可能与自发水解,大气氧化和/或光诱导的氧化有关。
6.4检查未处理的(对照)负载的细胞的荧光,这些细胞已保持在生长培养基或简单缓冲液中。在健康的细胞中,氧自由基被细胞酶和/或天然抗氧化剂消除。在染料加载恢复期之后,健康细胞应表现出较低水平的荧光,在整个实验过程中该荧光相对稳定。但是,可以观察到荧光的逐渐增加(由于自氧化)或减少(由于染料从细胞中丢失或光漂白)。在没有任何刺激或诱导的情况下,未经处理的健康细胞中的荧光爆发可能表明细胞死亡或其他氧化事件的进展。
7.可用H2O2或叔丁基氢过氧化物(TBHP)刺激阳性对照至终浓度〜100μM(根据细胞的敏感性和反应增加或减少剂量)。
产品参数
Name | DCFH-DA | ||
CAT# | D2215 | CAS# | N/A |
Storage# | 4℃避光干燥 | Shelf Life# | 12个月 |
Ex(nm)# | 504nm | Em(nm)# | 529nm |
MW# | 487.29 | Solvent# | DMSO |