货号：F3512S
储存条件：-20℃
产品组成：
组分 | 规格 |
Nt.BspQI (10 U/μl) | 200 μl |
10×cut Buffer C | 2* 1ml |
产品简介：
Nt.BspQl 是一种切刻内切酶，仅切割 dsDNA 底物的一条链，在dsDNA 底物上产生切口，而不切开 dsDNA。
建议反应条件：1x Cut Buffer，50°C温育；参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
本品在 37°C进行酶切反应时，有 100%的活性。
失活条件：80℃温育 20 min。
活性定义
1个活性单位(U)是指在 50 μl 反应体系中，50℃ 1h内完全酶切1μg 超螺旋pUC19 DNA 转化成开环形式所需的酶量。
质量控制
超长时间温育检测
将10 U Nt.BspQl与超螺旋 pUC19 DNA 底物在 50'C温育 16 h,通过琼脂糖凝胶电泳检测开环DNA无变化。
RNase 残留检测
将10 U Nt.BspQl与 500 ng RNA 在 37°C温育1 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过 90% 的 RNA 仍保持完整。
使用方法
1. DNA 酶切流程
1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
质粒DNA | |
ddH2O | Up to 50 μl |
10×Cut Buffer C | 5 μl |
底物DNA | 1 ug |
Nt.BspQI(10U/ul) | 1 μl |
Total | 50 μl |
a. DNA 底物中应不含苯酚、氣仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响Nt.BspQI酶活性;
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋)，然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
2）50℃温育 30 min~1 h；
3）80°C温育 20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
2.注意事项
1）反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
2）限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA 或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
不同DNA中的酶切位点数量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
10 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 7 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 |
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