产品货号：F7506S

储存条件：-20℃

同裂酶：Bse3DI, BseMI（注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。）

产品组成

产品简介

BsrDI来源于Bacillus stearothermophilus D70，由大小两个亚基组成，属于异二聚体酶。BsrDI识别特定序列GCAATG/CATTGC，切割顶链时在识别位点下游2个核苷酸处，底链则在识别位点后直接切割，产生特定的黏性末端，属于Type IIS 型限制酶，可用于Golden gate组装。

建议反应条件：1×Cut buffer B；37℃温育；参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件：80℃温育 20 min。

活性定义：1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，37℃ 1 h内完全酶切 1 µg λDNA 所需的酶量。

质量控制

功能活性检测

37℃下，在 20ul 反应体系中，10U BsrDI 能够在 15min 内完全消化1ug λDNA。

超长时间温育检测

37℃下，将 10U BsrDI 与1ug λDNA 共同温育 3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用 10 U BsrDI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a.  a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsrDI酶活性。

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）37℃温育 15min~60min；

（4）80℃温育 20 min 即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

2. 注意事项

① 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

② 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA 或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

③BsrDI可在CutOne Buffer中使用，但星号活性明显强于在Cut Buffer B中反应。若要使用Cutone Buffer进行反应，不建议酶切时间超过3 h或者超过 2 U的 BsrDI/µg DNA 底物。

不同 DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自 LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。