货号：T4209S

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产品说明

T7 Endonuclease l(T7 Endol,T7EI)，中文名称 T7 核酸内切酶1，可识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或 DNA 分叉点、异源双链 DNA，切割位点位于错配位点 5'端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。此外T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链 DNA。值得注意的是，T7EI可以识别长度大于或等于2 个碱基对(bp)的插入、缺失或突变导致的 DNA错配，但不能识别1 bp 的插入、缺失或突变。同时，T7 Endonuclease l无法识别所有的 DNA 错配，对 C错配的切割效果最佳。

本品为克隆重组 T7 Endonuclease l基因后在大肠杆菌中表达纯化获得的高纯度蛋白，不含其他内切酶或外切酶污染。

产品组分

产品应用

1.基因突变、SNP、TALEN 或 CRISPR/Cas9 形成的突变体检测。

2.检测或切割异源双链 DNA 和切刻的 DNA。

3.随机切割线性 DNA 进行鸟枪法克隆。

活性定义

1活性单位是指在 50 μL体系中，37°C反应1h将1 μg 超螺旋十字形结构 pUC(AT)的 90% 以上转换为线性结构所需的酶量。

质量控制

蛋白纯度检测

经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

非特异性内切酶活性

在20 μL反应体系中将10 U T7 Endonuclease l与 200 ng 的质粒 DNA在37℃共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20% 超螺旋质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。

DNase 活性

在20 μL 反应体系中将10 U T7 Endonuclease l与 15 ng 的双链DNA片段在 37℃共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化

使用说明

1. 在 EP管中配制如下反应体系：

a. Control Template 为突变型和野生型 PCR 产物 1:1(各 100 ng)的混合物，使用前需退火成含不配对的杂合链。退火后经T7EI酶切产生620 bp和175 bp条带。

2.  使用PCR仪退火

 T7 Endonuclease I酶切

① 37℃反应15~30 min；

② 85℃加热15 min或加入1.5 μl的0.25 M EDTA 终止酶切反应。

4. 将酶切产物使用2%的琼脂糖凝胶进行电泳检测

注意事项

1. T7 Endonuclease l具有底物结构选择性，以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时必须控制酶量和反应时间以达到最佳酶切效果。

2. 反应温度超过 42°C时会使 T7 Endonuclease l非特异性核酸酶活性增强，超过 55℃会导致酶活下降；

3. Mn²⁺会显著增加 T7 Endonuclease l非特异性核酸酶活性，请使用不含 Mn²⁺的 PCR Buffer 进行 PCR 扩增。

4. T7 Endonuclease |可兼容多种 PCR Buffer，PCR 产物可不经过纯化直接用于酶切检测，若酶切结果异常，可以将 PCR产物纯化后再进行实验。