货号：T6035
存储条件：-20℃，建议在首次使用时分装保存，避免反复冻融。
产品说明
TEV Protease (with His-tag) 来源于烟草蚀纹病毒，经基因工程改造并在大肠杆菌中重组表达获得，在保留天然TEV酶功能活性的同时，提高了其对pH和温度的耐受性。TEV Protease是一种高度特异性的半胱氨酸蛋白酶，常用于切除融合蛋白上的亲和标签。TEV Protease 严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，并在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间进行切割，常用的七氨基酸序列是Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。TEV Protease (with His-tag) N端带有His标签，使其可以在酶切完成后通过Ni亲和层析去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
产品组分
货号 | 名称 | 规格 | 存储温度 |
T6035-1 | TEV Protease (10 U/μl) | 100 μl | -20℃ |
T6035-2 | 10× TEV Buffer | 1 ml | -20℃ |
活性定义
1 活性单位 (U) 定义为在1× TEV Buffer中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量。
储存缓冲液
50 mM Tris-HCl；250 mM NaCl；10 mM DTT；1 mM EDTA；50% Glycerol；pH 7.5 @ 25℃。
质量控制
蛋白纯度
经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。
非特异性蛋白酶活性
30℃下，在50 μl反应体系中将10 U TEV Protease (with His tag) 与 3 μg标准蛋白共同温育1 h，通过SDS-PAGE检测蛋白质混合物未降解。
使用说明
1. 在 EP管中配制如下反应体系：
试剂 | 使用量 |
底物 | 20ug |
10× TEV Buffer | 5μl |
TEV Protease (10 U/μl) | 1 μl |
ddH2 O | Up to 50 μl |
2. 30℃孵育1 h或 4℃过夜（16 h左右）；
3. 向上述EP管中加入16 μl Protein Loading Buffer (SDS, 4×) (REF: G2526)，样品煮沸10 min，取10 μl进行SDS-PAGE分析；
4. 根据酶切结果，优化TEV酶的用量、孵育温度和孵育时间来确定最佳的反应条件。
注意事项
1. 可兼容常见蛋白酶抑制剂，如：抑肽酶、苯甲脒、亮抑酶肽、胃蛋白酶抑制剂、PMSF等。
2. 可兼容400 mM咪唑、2 M尿素、0.2 M NaCl、10 mM MgSO4、10 mM MnCl2、10 mM CaCl2和高达100 mM的 EDTA。
3. 该酶在有≥40%甘油、≥ 5 mM Zn2+、≥1 mM Cu2+和 ≥10 mM Co2+ 的反应体系活性会受到抑制。
4. TEV 最佳反应条件为pH7.0、30℃，但在pH6~9、4~37℃范围内均有活性，可根据目的蛋白的情况自行选择适宜的反应条件。
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