保质期1年
说 明
丙酮酸是代谢中的中心分子，其通过多种代谢途径进行使用和合成，其中包括糖酵解和丙氨酸的氨基转移作用。丙酮酸可在柠檬酸循环中进一步氧化，在糖异生期间转化为碳水化合物，或还原为乳酸。高水平的丙酮酸与肝脏疾病和遗传性疾病有关。丙酮酸也被用于刺激代谢，从而导致体重减轻。本试剂盒的测试方法是使用单一工作试剂将丙酮酸氧化和过氧化氢的检测一次性完成。在波长为570nm检测的颜色强度或 lem/ex = 585/530nm处的荧光强度与样品中丙酮酸浓度成正比，检测范围：比色法2 - 500 mM， 荧光法0.2 - 50 mM丙酮酸。
应 用
适用于测定各种生物样品（如血液、组织和培养细胞）中的丙酮酸含量。
试剂盒组成与保存：
混合酶: 10 mL -20°C保存
显色剂: 120 mL -20°C保存
标准品: 400 mL 25 mM -20°C保存
比色法检测步骤
注意：含硫醇基的试剂（如巯基乙醇，DTT），可能干扰该测试方法，应在样品制备中避免使用。
1. 将所有试剂放至室温。配备500 mM混合试剂：将10 mL 25 mM标准品和490 mL 水混匀。按照下表比例，用蒸馏水稀释标准品。
标号 | 标准品 + H2O | 终量(mL) | 丙酮酸 (mM) |
1 | 100mL + 0mL | 100 | 500 |
2 | 80mL + 20mL | 100 | 400 |
3 | 60mL + 40mL | 100 | 300 |
4 | 40mL + 60mL | 100 | 200 |
5 | 30mL + 70mL | 100 | 150 |
6 | 20mL + 80mL | 100 | 100 |
7 | 10mL + 90mL | 100 | 50 |
8 | 0mL + 100mL | 100 | 0 |
取透明平底96孔板，分别将10 mL不同浓度的标准品和10 mL样本放入各孔中。
2. 在洁净的试管中，将94 mL 混合酶 和 1 mL显色剂混匀。向每个孔中加入90 mL反应试剂并轻敲使其混匀。
3. 室温下培养30分钟，在570nm 处读取光密度。意：若OD样品大于OD标准品，需用水稀释样本并重复检测，结果需乘以稀释系数。
浓度计算
用标准品的OD值减去水空白值（标号8），对标准品浓度作图并得出斜率。样品的丙酮酸浓度计算如下：
荧光法检测步骤
对于荧光测试法，检测范围为0.2至50mM丙酮酸。将比色法下准备的标准品按1：10的比例用水稀释。
将10mL标准品和10mL样品分别加入不同的黑色平底96板孔中。加入90 mL工作试剂 (见比色法步骤)并轻敲使其混合。室温下培育30分钟，在lex = 530nm 和 lem = 585nm处读取荧光强度。如果在384孔板中检测，则使用5mL 标准品和45 mL工作试剂。丙酮酸样品浓度的计算方法：
注意事项：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。
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