一 般 说 明

乳酸脱氢酶（LDH）是一种可催化丙酮酸和乳酸相互转化的氧化还原酶。 细胞在组织损伤或红细胞溶血后会将LDH释放到血流中。由于LDH是一种相当稳定的酶，它已被广泛用于评估组织和细胞是否存在损伤和毒性。LDH在某些特定的病理状态如癌症中会被提高。LDH的定量具有一系列不同的应用。本检测是基于酶促反应中四唑盐MTT会被还原成还原型MTT所形成的紫色物质，其吸光强度与酶活性成正比。 检测范围：2 -200U/L。

应 用

适合用于检测生物学样本如血清、血浆、细胞、培养物和发酵培养基中的L(+)-乳酸。

试剂盒组成

缓冲液： 10 mL              NAD溶液：  0.5 mL

MTT溶液：  0.75 mL                 PMS溶液： 0.75 mL       

校准液：  2 mL

储存：所有试剂均在-20°C下保存。有效期 1年

检测步骤

该项检测基于动力学反应，为确保培养时间相同，将反应液加至样品中时动作应迅速，试剂的混和应快而彻底。建议使用多通道加样器。可在室温或30°C 下进行检测。

1、样品准备

血清和血浆样品可直接检测。

组织样品：剥离前，先用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）洗去血液。每克组织用5mL 含100 mM 磷酸钾（pH 7.0）和2 mM EDTA 的缓冲液均浆。4°C下10,000g 离心15分钟。取上清液用于检测。

细胞提取物：4°C下2,000g 离心5分钟以收集细胞。对于粘附细胞，避免使用蛋白水解酶来采集细胞，而应使用橡胶刮子。用适当体积的含100 mM磷酸钾（pH 7.0）和2 mM EDTA 的冷缓冲液均浆或超声降解细胞。4°C下10,000g 离心15分钟。取上清液用于检测。所有样品均可在–20 至 –80°C 下存放至少1个月。

2、反应试剂准备

将所有试剂放至室温。按如下比例为每个96孔板测试孔准备反应试剂：将14 mL MTT 溶液、8 mL NAD溶液、8 mL PMS溶液和170 mL底物缓冲液混匀。建议现配现用。

3、反应 

将200 mL水（OD_H2O）和200 mL校准液（OD_CAL）分别移至透明平底96孔板的测试孔中； 将10 mL 样品和190 mL反应试剂移至样品孔中，轻轻振荡混匀。  读取OD_565nm（OD_S0），25 分钟后再读取一次（OD_s25）。

注：若样品中的LDH活性大于200 U/L，需用水稀释样本并重复检测。 

浓度计算公式  

OD_S25和OD_S0分别是25分钟和0分钟时读取的样品OD_565nm值。e_mtt 是还原型MTT的摩尔吸光系数。l是根据校准溶液计算得出的光程长度。OD_CAL和OD_H20分别是校准液和水的OD_565nm值。反应体积和样品体积分别是200 mL和10 mL。n 是稀释系数。单位定义：1个单位（U）的LDH在pH 8.2下每分钟可催化1 mmole乳酸盐转化成丙酮酸盐。

预防措施：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。