保质期6个月
一般描述
淀粉是高分子碳水化合物，是由葡萄糖分子聚合而成的多糖。其基本构成单位为α-D-吡喃葡萄糖，本公司的淀粉测试盒仅使用单一工作试剂，将酶对淀粉的分解和葡萄糖的检测结合为一个步骤。反应产物的吸光强度(570nm) 或荧光强度(lem/ex = 585/530nm）与样本中的淀粉浓度成正比。检测范围：比色法2-200 mg/mL淀粉；荧光法0.2-20 mg/mL淀粉。
试剂盒组成与保存
缓冲液 | 12 mL | -20°C保存 |
酶A | 120 μL | -20°C保存 |
酶B | 120 μL | -20°C保存 |
显色剂 | 120 μL | -20°C保存 |
标准品 | 50 μL 50 mg/mL | -20°C保存 |
样品制备
可溶性淀粉：磨碎5-10mg样品，用1mL 90%乙醇洗去自由葡萄糖和小的低聚糖。经60℃旋转加热5分钟。在10,000转/分的离心机下离心2分钟。慢慢倒出上清液，重复清洗两次，洗净乙醇。加1 mL蒸馏水至淀粉颗粒，沸水浴中加热5分钟。在10,000转/分的离心机下离心2分钟。上清液是可溶性淀粉，抗性淀粉是不溶颗粒。吸出可溶性淀粉，对不溶颗粒加0.2 mL二甲亚砜，在沸水浴加热5分钟。测试前按1:100的比例用水稀释样品。
不溶性淀粉可用KOH/H3PO4 或KOH/acetate抽提。
比色法检测步骤
1．在检测前应将所有试剂置于室温。实验过程中将酶存放在冰箱里或冰上。
2． 标准液和样品：混合5μL标准液和1245 μL蒸馏水得到200 mg/mL 预混液，按下表比例稀释标准品：
标号 | 预混液 + H2O | 终量 | (μg/mL) |
1 | 200 mL + 0 mL | 200 | 200 |
2 | 150 mL + 50 mL | 200 | 150 |
3 | 100 mL + 100 mL | 200 | 100 |
4 | 50 mL + 150 mL | 200 | 50 |
5 | 0 mL + 200 mL | 200 | 0 |
取10μL稀释后的标准品和样品溶液加入96孔板。
3．反应试剂。 按照每孔需缓冲液90 μL、酶A 1 μL、酶B 1 μL、显色剂1 μL的比例，配制足量反应试剂，并在每个标准品与样品孔中加入90 μL反应试剂，轻拍使其混合。
4．室温下培养30分钟，在570nm下读取OD值。
荧光法检测步骤
使用荧光测定法时，线性测量范围为0.2 - 20 mg/mL 淀粉。
按比色法制备的标准品步骤1-3，稀释成为0、5、10、15、20 mg/mL标准液， 用黑色96孔板。在室温下反应30分钟，在lem = 585nm，lex = 530nm的条件下读取荧光值。
浓度计算：
用标准品的值R标准品 减去空白对照值R空白(OD570nm或荧光值)，对标准品浓度作图得出斜率。样品的淀粉浓度计算如下：
R样品 和R空白是样品或空白（标号5）OD570nm或荧光值。
备注
1. 该实验基于一种动力学反应，建议使用多通道移液器加工作试剂。
2. 干扰：含有巯基（-SH）的试剂（e.g. 二巯基苏糖醇，b-巯基乙醇）会干扰实验，样品制备过程中应避免巯基试剂。
3.预防措施：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。
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