保质期6个月
一般说明
谷氨酰胺是一种在肌肉中合成的氨基酸，它在蛋白质合成、酸碱平衡、合成代谢过程中发挥重要作用。本试剂盒基于将谷氨酰胺水解为谷氨酸，用比色法测定产物，在565 nm处测定的吸光强度与样品中谷氨酰胺的浓度成正比。检测范围0.05 - 2 mM谷氨酰胺。
应 用
直接检测：血清、血浆、尿液、组织和细胞培养物。
试剂盒组成与保存
缓冲液：15 mL NAD试剂：1 mL A酶：120 mL MTT试剂：2 x 1.5 mL B酶：220 mL
标准液：400 µL
终止试剂：25 mL
储存： -20°C保存。
检测步骤
1、标准曲线：将5µL标准液和245µL蒸馏水混合，得到2.0 mM谷氨酰胺预混液，照下表稀释标准液：
标号 | 预混液 + H2O | 终量(µL) | (mM) |
1 | 100 µL + 0 µL | 100 | 2.0 |
2 | 60 µL + 40 µL | 100 | 1.2 |
3 | 30 µL + 70 µL | 100 | 0.6 |
4 | 0 µL+100 µL | 100 | 0.0 |
转移20 µL稀释不同浓度的标准品到平底透明96孔板中。
样品：转移20 µL样品到96孔板的不同孔中。
注意：如果已知样品含有谷氨酸，则需要样品空白对照。转移20 µL样本到另一孔。
2、反应。为每个标准液和样品孔准备反应试剂：混合65 µL缓冲液、1 µL A 酶、1 µL B 酶、2.5 µL NAD试剂和14 µL MTT试剂。为空白样品准备空白反应试剂：混合65 µL缓冲液、1 µL B 酶、2.5 µL NAD试剂和14 µL MTT试剂(即没有A 酶)。反应试剂现用现配。
向每个标准液和样品孔加80 µL反应试剂。空白样品孔加80 µL空白反应试剂。轻敲平板使液体混合均匀。
3、室温下反应40分钟。每孔加入100 µL终止试剂停止反应。在565nm处读取吸光值。
浓度计算
标准品吸光度减去对照(标号4)的吸光度，根据差值描绘标准曲线，确定斜率(Slope)并计算谷氨酰胺的浓度。
注意：如果计算出样品谷氨酰胺的浓度高于2mM，稀释样品重新测试，将得到的结果乘以稀释倍数n。
换算：1 mM谷氨酰胺 = 146 mg/L。
注意事项
1. 本产品仅供研究用，使用过程中严格遵循实验安全措施。
2. 下列物质会干扰试验，在样品制备时要避免：抗坏血酸、SDS (>0.2%)、叠氮化钠、NP-40 (>1%)、吐温-20 (>1%)。
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