有效期1年

说 明

抗坏血酸，也称为维生素C，是由植物和一些动物物种（不包括人类和其他灵长类动物）产生的六碳内酯。抗坏血酸可作为多种酶的酶促辅助因子，可用作单加氧酶和双加氧酶的电子供体。抗坏血酸还起到强力抗氧化剂的作用，特别是对活性氧。本公司的产品为测定抗坏血酸提供了一种简便、直接、高通量的检测方法,该方法利用抗坏血酸与抗坏血酸氧化酶反应生成H2O2。H2O2与一种特殊的显色剂反应形成一种粉红色产物，其吸光强度（570nm）或荧光强度（530/585nm） 直接与样品中的抗坏血酸浓度成正比。线性检测范围：比色法6～1000 mM，荧光法 1～100mM 抗坏血酸。

适用范围

直接检测生物样品如血清、血浆、尿液、组织和细胞培养物的抗坏血酸浓度。

试剂盒组成与保存

缓冲液： 10  mL                   -20°C保存

酶试剂：120 mL                   -20°C保存

显色剂：120 mL                   -20°C保存

标准液：400 mL 10 mM         -20°C保存

比色法检测

注意：已知含巯基的试剂（如β-巯基乙醇，二硫苏糖醇> 5mM）可干扰这项检测 ，样品制备过程中应避免使用。

样品处理：液体样品如血清和血浆可直接检测。组织和细胞（106～107）提取物则用预冷的1 x PBS 溶液均浆并以14,000rpm的转速离心5分钟制备而成。取上层清液用于检测。对于乳汁样品，用100mL 6N HCl 与600mL乳汁混合，以14,000rpm的转速离心5分钟。将300mL上清液移至一洁净试管内，用50mL 6N NaOH中和。将中和后的上层清液用于检测（稀释系数n = 1.36）。

1. 将所有试剂放置至室温。打开试管前先短暂离心，检测过程中将已解冻的试管始终置于冰上。

2. 标准品：将22mL 10 mM标准液与198mL 蒸馏水混合（最终浓度为1000 mM）。用H2O稀释标准品，比例如下：

将 20 mL稀释后的标准品移至透明平底96孔板的各个孔内。

样品：将每份样品各20 mL移至孔板的各个孔内。

3. 显色反应：按下列比例配制足够的反应试剂，对于每个反应孔，将85 mL缓冲液、1 mL酶试剂和1 mL显色剂混合。向每孔加入80 mL反应试剂，轻轻振荡混匀，室温下培养10分钟。

4. 读取570nm波长处的吸光度。 

荧光法检测

荧光检测的步骤与比色检测相似，但须使用(1) 0、30、60和100mM抗坏血酸标准品；(2)黑色96孔板（读取lex = 530 nm 和 l em = 585 nm下的荧光强度）。

注意：如果计算出的样品中抗坏血酸浓度大于 1000 mM（比色检测）或100 mM（荧光检测），则用水稀释样品后再次检测，用稀释系数n 乘以结果。

浓度计算

从标准品的测值中减去空白对照品的测值（标号4），绘制DOD或DF与标准浓度的曲线。测定斜率(Slope)并计算样品中抗坏血酸的浓度：

R样本和 R空白分别是样品和H2O空白对照品的吸光度或荧光强度读数。n是样品稀释系数。

注意事项：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。