一般说明
糖原是一种葡萄糖支链聚合物，是动物体内主要短期能量储存分子。 糖原主要在肝脏和肌肉组织中合成，占肝脏重量的10%和肌肉重量的1-2%。 当肌肉糖原通常就被肌肉使用，而肝脏糖原是调节血液葡萄糖水平的重要缓冲液。 糖尿病和因为先天代谢缺陷导致的糖原储存疾病，会导致糖原代谢失调。本公司生产的糖原试剂盒仅使用单一工作试剂，将酶对糖原的分解和葡萄糖检测反应结合为一个步骤。反应产物的吸光强度(570nm) 或荧光强度(lem/ex = 585/530nm）与样本中的肝糖原浓度成正比。该方法简单又方便，反应时间只需30分钟。检测限度：比色法2-200 μg/mL肝糖原；荧光法0.2-20 μg/mL肝糖原。
应 用
适合于确定各种组织，比如肝脏等和细胞培养（粘附或悬浮细胞）中糖原浓度。
试剂盒组成
缓冲液：12 mL 酶A： 120 μL 酶B：120 μL
显色剂: 120 μL 标准品：50 μL 50 mg/mL
储存：在-20°C保存。有效期1年
比色法检测步骤
1．在检测前应将所有试剂自然放置到室温。实验过程中将酶存放在冰上。
2． 标准液和样品：混合5μL标准液和1245μL蒸馏水得到200 μg/mL预混液，按下表比例稀释标准品：
标号 | 预混液 + H2O | 终量 (μL) | μg/mL |
1 | 200 mL + 0 mL | 200 | 200 |
2 | 150 mL + 50 mL | 200 | 150 |
3 | 100 mL + 100 mL | 200 | 100 |
4 | 50 mL + 150 mL | 200 | 50 |
5 | 0 mL + 200 mL | 200 | 0 |
取10 μL稀释后的标准品和样品分别加入96孔板。
3．反应试剂: 按照每孔需缓冲液90 μL、酶A 1 μL、酶B 1 μL、显色剂1 μL的比例，配制足量反应试剂。在每个标准品与样品孔中加入90 μL反应试剂，轻拍使其混合。
4．室温下培养30分钟，在570nm波长下读取OD值。
荧光法检测步骤
使用荧光测定法时，线性测量范围为0.2 -20 μg/mL 肝糖原。
将比色法中制备的标准品，稀释成为0、5、10、15、20 μg/mL标准液， 用黑色96孔板。在室温下反应30分钟，在lem = 585nm，lex = 530nm的条件下读取荧光值。
浓度计算
用标准品的值减去空白对照值 (OD570nm或荧光值)，对标准品浓度作图得出斜率。样品的肝糖原浓度计算如下：
R样品 和R空白是样品或空白（水或样品空白，如下）OD570nm或荧光值。
备注
1. 如果样品含有葡萄糖，应混合缓冲液90 μL、酶B 1 μL、显色剂1μL（无酶A）制备样品空白对照液，并加入样品空白对照孔中。用标准品的值减去空白对照值 (OD570nm或荧光值)。计算肝糖原的浓度。
2. 该实验基于一种动力学反应，建议使用多通道移液器加工作试剂。
3. 干扰。含有巯基（-sh）的试剂（eg.二巯基苏糖醇，β-巯基乙醇）会干扰实验，样品制备过程中应避免巯基试剂。
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