货号：CS001
存储条件：常温保存，2年有效
产品特点：
带形美观：第四代核酸染料CelStain克服了国外同类染料分不开大片段DNA的缺点，电泳条带清晰整齐美观。
方便观测：用手持紫外灯或者手持蓝光仪都可以随时观察电泳情况。
相对安全：独特油性大分子(分子量>1000)使其不能穿透细胞膜进入细胞，Ames-test实验表明，在凝胶染色浓度下该染料的没有EB类似的诱变性，使用安全，可以代替致癌物溴化乙锭EB作为各种核酸电泳的染色剂。
完美兼容：兼容Red和Green--CelStain同时适用于紫外成像仪/激光成像仪和蓝光仪！同时拥有EB和Sybr Green类似的光谱，无需改变滤光片及观察装置，标准 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用。
Page胶肉眼可观测条带(不需要激发光,包括紫外和蓝光）。
迁移率好：EB小分子很快跑出胶外，所以EB容易导致小DNA片段看不清，大分子CelStain完全克服这一点。
定量准确：适用于核酸分子大小的确定和定量，EB对小DNA片段定量不准确。
染色均匀：电泳时染色均匀，整片胶的背景一样。EB会导致胶的整体背景不同，经常出现阴阳背景（胶的背景部分亮，另一部分暗）；EB长时间、长距离的电泳，EB信号强度会相应下降，大分子CelStain完全克服这一点。
灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中稳定。
耐光性强：实验室的日常环境下可以常温放置24个月。
信噪比好：样品荧光信号强，背景信号低，肉眼可观测到亮度明显比EB强，EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴阳背景。
操作简单：与EB用法完全一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗。
适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
操作步骤：
一．胶染法（推荐方法，用法类似EB）
制胶时加入SafeStain核酸染料(染料灵敏，每100mL 琼脂糖溶液中加入10μL SafeStain原装液即可)。 按常规方法电泳。
1. 实验室材料和试剂：
（1）实验样品：质粒DNA，DNA marker（国产的DNA marker浓度高，至少稀释2～3倍后使用!）
（2）TBE缓冲液配置：10X TBE电泳缓冲液[Tris 107.8146g (890mM),硼酸55.0287g(890mM)，EDTA 5.845g(20mM),加NaOH约4g调节pH=8.3；定容1000mL；用ddH2O稀释10倍配制1X TBE电泳缓冲液。
（3）TAE缓冲液配置：50X TAE电泳缓冲液[Tris 242g (2M),EDTA 37.2g(100mM),加醋酸约57ml调节pH=8.5；定容1000mL]；用ddH2O稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。
（4）溴酚蓝指示剂，1%的西班牙琼脂糖凝胶
（5） 仪器：电泳仪（130v），移液器(0.5~10ul)，凝胶成像仪
2. 实验步骤：
（1）制胶：将0.5g琼脂糖溶于50mL 1X TBE电泳缓冲液中，加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入5ul的SafeStain凝胶电泳染料，摇匀。
（2）倒胶：将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内，避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端，距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳，切勿晃动。
（3）置胶：待约30分钟左右胶体充分凝固后，缓慢垂直向上拔起点样梳子，切勿用力过猛。（夏季适当延长凝胶时间）
（4）将琼脂糖凝胶放入电泳槽内，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。
（5）将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本（1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合）加入到点样孔内。
（6）盖上电泳槽盖，开启电源，使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间，一般可选择130V)。
（7）当DNA条带距离点样孔约1~50px后关闭电源，(约30～40分钟)取出凝胶。
（8）用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注：此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热，制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。
优化电泳条件参考事项：
1） 因为EB是插入DNA内部变成一个整体分子，所以不容易出现迁移/弥散的问题，而大分子的CelStain与DNA是通过静电吸引非共价结合的，在DNA外面偶尔出现条带迁移，特别是大片段DNA！
2） 染料过于灵敏，建议marker浓度稀释一倍，特别是含大片段多的marker！国产的marker是基于EB染料开发的酶切的混合片段，浓度偏高；另外，EB显示不出来酶切的混合片段的杂带，SafeStain的高灵敏性会显示出来。少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，请使用后染法。
3） 染料过于灵敏，建议未知浓度的样品的稀释一倍后上样，特别是含大片段多的样品。推荐上样量为50～200ng/泳道(8泳道小胶孔)
4）与EB相比，CelStain电泳电压要低一些，电泳时电压不宜过高，一般不要超过130V。跑胶的时间40～60min。
5） SafeStain染料和样品混合后点样到琼脂糖凝胶中，不推荐这种点样法。
6） 由于SafeStain具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃振荡以保证染料充分混匀。可以将SafeStain原液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。SafeStain兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
7） 如果总是看到条带弥散或分离不理想，为了避免染料可能对DNA迁移的干扰，建议使用电泳后染胶。使用后染法（泡染法）染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关！
*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
二．泡染法
（1）按照常规方法进行电泳。（用于胶回收等DNA高浓度的样品实验强烈推荐泡染的方法！）
（2）将SafeStain 10,000× 储液稀释约1万倍到0.1M NaCl溶液中，制成1× 染色液。（例如将5μL SafeStain 10,000× 原液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中）。
（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的1× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
（4）用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统或者蓝光仪下观察结果。
*注意：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右；1× SafeStain®染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
三．核酸电泳的PAGE步骤：Page胶实验室灯光下，肉眼可观测条带，不需要外源激发光（包括紫外和蓝光）。
1）将TBE制备的凝胶放入电泳槽中，用夹子夹住边缘。
2）用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。
3）用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合，用微量移液管加入加样孔。
4）将电极与电源相连（正极接下槽），打开电源一般90V；1～8V/cm。进行电泳9h。
5）电泳至标准参照染料迁移至所需位置（一般是电泳到二甲苯完全迁出，溴酚蓝距底边2～75px停止）。关闭电源，拔掉插头，弃去电泳槽中的电泳液。
6）将凝胶取下来放入，染色皿中，加1X SafeStain的1X缓冲液中的振荡染色30-60分，放置在紫外检测即可。
*注意：与琼脂糖凝胶不同，不能用预染或点染的方法；只能用泡染的方法显色，由于聚丙烯酰胺比较致密，染料不容易深入，显色效果没有琼脂糖凝胶好。
