产品货号：F7513S
储存条件：-20℃
产品组成
组分 | 规格 |
SgrAI（10U/ul） | 50ul |
10×Cut Buffer B | 1ml |
产品简介
SgrAl 来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseus)，经大肠杆菌重组表达后纯化获得，特异性识别并切割CR/CCGGYG 序列。SgrAl 属于非快切系列限制酶，但可兼容LabFD 缓冲液,可用于和其他 LabFD 系列限制酶进行双酶切。基于酶的特殊性SgrAI 需要两个及以上的酶切位点才能实现高效切割，对单位点的底物切割效率显著下降。
建议反应条件：1×Cut buffer B；37℃温育；参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件：80℃温育 20 min。
活性定义：1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，37℃ 1 h内完全酶切 1 µg λDNA 所需的酶量。
质量控制
功能活性检测
37℃下，在 20ul 反应体系中，10U SgrAI 能够在 15min 内完全消化1ug λDNA。
超长时间温育检测
37℃下，将 10U SgrAI 与1ug λDNA 共同温育 3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测
37℃下，使用 10 U SgrAI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
使用方法
1.DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
ddH2O | Up to 50 ul |
10×Cut Buffer B | 5 ul |
底物 DNAa | 1 ug |
SgrAI（10U/ul） | 1 ul |
Total | 50 ul |
a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响SgrAI酶活性。
（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
（3）37℃温育 15min~60min；
（4）80℃温育 20 min 即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
2. 注意事项
①酶切需要两个或两个以上识别位点。
②每 μg DNA 底物使用的酶量不建议超过 10 U。
③因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过1h也不会提高酶切效率，除非增加酶量。
④延长酶切时间、高浓度酶或>5% 的甘油浓度可能产生星号活性,尤其不建议过夜酶切。
不同 DNA 中的酶切位点数量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
6 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 剪切受影响 | 剪切受阻 | 剪切受阻 |
在不同反应缓冲液中的活性
LabFD™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart®Buffer | Takara QuickCut™Buffer | |
活性 | 50% | ＜12.5% | 50% | ＜12.5% |
注：活性数据来自 LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。
