货号:G10191
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产品简介
Lablead G 系列介质是以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质,具有极⾼的选择性,其⼯作原理主要是利⽤具有⽹状结构的葡聚糖凝胶的分⼦筛作⽤,根据被分离物质的分⼦⼤⼩不同来进⾏分离,粒径⼤⼩和孔径⼤⼩是控制先后流出的关键因素。层析时,⼤于凝胶孔径的⼤分⼦,被阻于凝胶相外,沿着凝胶颗粒之间的间隙⾛,下移速度最快,故最先洗脱下来,中分⼦物质部分进⼊凝胶内部,洗脱速度为其次,⽽⼩分⼦物质因全部进⼊凝胶,受到阻⼒最⼤,故最后被洗脱下,如此物质得到分离。
应⽤场景:常⽤于蛋⽩及多糖的纯化和分离,分⼦量的测定等。
产品参数
性能 | 指标 |
基质 | 交联葡聚糖 |
粒径范围/μm | 40-120 |
球蛋白分离范围(Da) | <1.5×103 |
最高流速(cm/h) | 47 |
pH稳定性 | 2-12 |
化学灭菌 | 121℃,30min高压灭菌,pH=7.0 |
操作说明
将填料填装到层析柱中,根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱⾼。
1. 缓冲液准备
一般选用水相缓冲液,缓冲液的pH和电导对于分离的效果影响不大,主要考虑样品在缓冲液的稳定性。
2. 平衡
⽤5~10CV的缓冲液平衡柱子,务必使流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全⼀致。
3. 上样
①介质对样品组分的分离是按组分分⼦量⼤⼩进⾏的,分⼦量⼤的先流出来。
②凝胶过滤的上样量⼀般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1%~2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱⾼的选择也与分离要求相关,柱⾼控制在40~50 cm以下,过⾼的凝胶层会引起较⼤的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有⼀定柱⾼和流速控制,脱盐时⾼径⽐为5:1即可。
③样品中如有杂质或沉淀应该在上样前过滤或离⼼除去,样品的粘度不能过⾼,否则影响分离效果。
4. 洗脱
样品洗脱过程中使⽤的流速不要超过推荐的最⼤流速。凝胶过滤是⼀种⾮吸附性⾊谱技术,所有的样品物质都应在⼀个柱体积之内洗脱出来。完成⼀个操作后,如仍⽤同⼀种缓冲液,⾊谱柱不需要再平衡。
5. 在位清洗及保存
Lablead G系列介质使⽤⼀段时间后有可能柱效下降、反压增加、分离效果变差、层析介质颜⾊变化等,可采⽤下⾯的流程进⾏在位清洗(CIP):
①⽤纯化⽔冲洗2 CV;
②⽤1M NaCI冲洗1 CV;
③⽤0.2M NaOH冲洗1 CV;
④⽤纯化⽔冲洗4 CV;
介质的保存:20%⼄醇溶液室温保存。