货号：T1058
储存：-20℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃，有效期一年，使用前请先将本品轻轻混匀。
1. 产品简介：
RFect mRNA Transfection Reagent是专门用于mRNA高效转染的转染试剂。RFect mRNA具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上（AAV293细胞等）。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，RFect mRNA转染试剂采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率只有5%左右。RFect mRNA使用也非常方便，先将转染试剂与mRNA混合，再将转染试剂-mRNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
2. RFect mRNA转染试剂的特点：
卓越的细胞转染性能：可高效转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上；
·极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率只有5%左右，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
·抗血清干扰，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。
3. 注意事项：
· 转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。
· 首次转染，建议选择24孔板进行细胞密度优化实验，如选择3个孔，每孔分别接种1.0x105、1.5x105、2.0x105个细胞，选择转染效果最优的细胞接种数进行正式实验。
· 应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰RFect与mRNA形成复合物，转染所用培养基中尽量不要使用抗生素。
· 本试剂主要用于mRNA转染，如需质粒DNA、mRNA、siRNA均可转染的试剂，请选择其它核酸转染试剂。
· 转染试剂使用前请务必用移液器轻轻吹打混匀，使用后，请立即旋紧Rfect管盖，尽快放于-20℃，避光保存。
4. 适用细胞系：
293T，A549，B16F10，HEK 293，HeLa，Hepa 1-6，HepG2，BHK-21，BNL.CL2，BRL-3A，C2C12，C6，Clone 9，COS-1，COS-7，Daoy，DBTRG-05MG，DI-TNC1，DU 145，HLF-a，Huh-7，K562，KB，KLN 205，NCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR3， PC3，PC-12，4T1，ACNN，BJ，BT-549，CACO-2，H460，H9C2，HCT116，Hep-3B，Hs578T，HT-1080，MCF10A，MDA-MB-231，NCI-H23，PANC-1，RAW264.7，Saos-2，RD，SK-MEL-28，SK-OV-3 SW480，U2OS，Vero，293F，BE(2)C，CHO-S，CV-1，HT-29，Jurkat，RKO，SK-BR3等。
5. 方法步骤（以24孔板转染为例）:
A. 细胞接种:
1.转染前一天，根据细胞密度优化结果对细胞进行转接，24孔板一般接种细胞数为1.5x105左右，培养基体积为0.5mL，培养过夜；
2.最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. RFect /mRNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl Trans buffer，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl Trans buffer，再加入适量的mRNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3.将mRNA-Trans buffer混合物滴加至RFect-Trans buffer混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟后，立即转染。注意： RFect-Trans buffer混合物和mRNA-Trans buffer混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
C.转染:
1.将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2.培养6小时后即可观察标记荧光，表达蛋白检测时间一般为24~60小时，最佳荧光观察时间或蛋白检测时间需实验确定。
3.RFect在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入RFect/mRNA复合物12~24小时后进行。
附表：不同培养体系推荐初始转染条件
