产品货号：F7519S

储存条件：-20℃，有效期两年

同裂酶：TseI，注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

ApeKI来源于超嗜热需氧古生菌(Aeropyrum pernix) K1，属于Type IIP型限制酶，识别并切割G/CWGC序列，形成3碱基突出的粘性末端。ApeKI是基因组简化测序（genotyping-by-sequencing，GBS）的首选酶之一，此外，还广泛应用于动植物遗传研究、群体进化分析及功能基因定位等领域。

建议反应条件：1×Cut Buffer C；75℃温育；参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。本品在37℃进行酶切反应时，有<10%的活性。

失活条件：不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。

活性定义：1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，75℃ 1 h内完全酶切 1 µg λDNA 所需的酶量。

质量控制

功能活性检测

75℃下，10 U ApeKI能够在15 min内完全消化1ug λDNA。

超长时间温育检测

75℃下，将10 U ApeKI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

75℃下，使用10 U ApeKI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响ApeKI酶活性。

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）75℃温育 15min~3h；

（4）通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应（可选）。

2. 注意事项

① 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

② 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA 或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切

反应抑制效应越强。

不同 DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自 LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。