
货号:S1090
存储条件:短期内(60天)可放置于2-8℃保存,长期保存可冻存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。2-8℃运输。-20℃保存有效期1年
产品介绍
优纯裂菌液是一款专为大肠杆菌设计的高效、温和型裂解试剂,单组分操作,简便快捷。
本产品创新性地融合了复合溶菌酶与重组超级核酸酶的双重作用机制:复合溶菌酶可在1分钟内从多个位点快速水解细菌细胞壁,实现胞内蛋白的温和释放;重组超级核酸酶则能迅速降解释放出的DNA和RNA,显著降低裂解液粘度,提升样品澄清度。
与传统超声或物理破碎法相比,优纯裂菌液无需剧烈条件,避免了因物理剪切或过热导致的目的蛋白降解与变性。使用本产品可有效提高后续纯化效率,延长填料寿命,减少内毒素干扰,是实验室及工业生产中理想的蛋白提取解决方案。
主要用途:
小量裂菌:快速裂解菌体,适用于诱导表达后的可溶性鉴定。
中量裂菌:高效释放蛋白,适用于蛋白纯化及性质分析。
大量裂菌:显著降低样品粘度,提升规模制备效率与蛋白纯度。
使用方法
一、菌体收集
培养并诱导表达目的蛋白。
离心或超滤去除上清,收集菌体,称重记录。
二、菌体裂解
1. 重悬菌体:按1 g湿菌体加入9 mL缓冲液(推荐TBS:20 mM Tris、150 mM NaCl、pH 7.6)重悬,充分混匀。
注:若使用PBS,核酸酶活性略有抑制,可适当延长裂解时间。
2. 加入裂菌液
按重悬液体积的1/9加入优纯裂菌液(如9 mL重悬液加1 mL裂菌液),混匀。
3. 静置裂解
4~25℃静置1~10分钟,菌液逐渐变清亮。
可溶蛋白:裂解1分钟即可释放80%以上目的蛋白。
包涵体蛋白:可延长裂解时间,充分消化细胞壁,提高包涵体纯度。
4. 分离上清与沉淀
≥8000 g离心,收集上清(可溶蛋白)或沉淀(包涵体)进行后续纯化。
注意事项:
1. 兼容性说明
MBP标签不兼容(本产品释放胞壁二糖,会竞争结合MBP标签,影响纯化效果)其他标签不受影响:如His、GST、Fc、S、CBD等常用标签均可正常使用。
2. 使用建议
加入裂菌液前,务必将菌体重悬均匀,确保裂解效果。
裂解时间:1分钟即可完成裂解;若缓冲液含磷酸盐、高盐或pH偏离中性,裂解速度会减慢,可适当延长时间。
裂解温度:推荐4℃低温裂解,控制蛋白降解;室温裂解酶活更高,适合稳定性好的蛋白。
诱导剂浓度:推荐0.1 mM IPTG,无需反复优化;若提高可溶比例,建议优先低温诱导或加促溶标签。
3. 样品处理
离心澄清:≥8000 g离心后样品已充分澄清,一般无需额外过滤。
菌体保存:暂不用时请于-20℃或-80℃保存,防止蛋白降解。
4. 纯化提示
本产品不含EDTA,不会导致镍离子脱落。