货号：C1054

储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

产品简介

菁染料是性能优良的荧光标记染料，摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的，其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长，每增加一个双键，按照Huoffman规则正好红移约100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物；另外，Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低，是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。

菁染料琥珀酰亚胺酯（CyDye NHS）的标记

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之间荧光强度最高，F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性，标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯，但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.5～9.4)时10分钟F/P可达5～6，而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

操作步骤

1.水溶性Cy5 NHS标记(D-ser2)-leucineenkephalin 

1)Cy5NHS1.0mg溶解于400uLDMSO后，加入到1mL的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate(YSGFLT,0.75mg) 的400uL DMSO溶液。（Dye和peptide投料比是1:1）

2)然后加入15uL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。

3)用HPLC纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱从0.1%TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL/min。（对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相）

4)收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。

5)产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存；必要时可用质谱表征。

6)CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月；更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。

2. F/P计算：

Cy5在650nm的摩尔吸光系数为250000 M-25px-1，所用蛋白在280nm处的摩尔吸光系数为170000M-25px-1；Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。

按以下公式计算F/P值:

[Cy5 dye]=(A650)/250000

[peptide]=[A280-(0.05×A650)]/170000

F/P final=[dye]/[peptide]={0.68×A650}/{A280-(0.05×A650)}

产品参数