货号：T1214

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产品说明

2xLab SuperHiFi hotstart mix是即用型2×预混合溶液，包含Lab SuperHiFi hotstart DNA Polymerase、dNTPs和精心优化的反应缓冲液，只需加入模板、引物和水即可进行高保真PCR反应。Lab SuperHiFi hotstart DNA Polymerase使用抗体法进行封闭，室温下酶活被完全抑制， 95℃加热30 s即可完全释放活性，从而减少非特异性扩增。

适用范围 本产品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒以及粗品为模板的 PCR反应。

使用说明

1、反应体系

a.当扩增片段 GC 含量 >60% 且优化条件也无法正常扩增时，推荐调整 PCR 程序，程序推荐：Touchdown PCR（降落 PCR）程序。

模板用量：

基因组DNA：10~200 ng

质粒或病毒DNA：10 pg~50 ng

cDNA*：1~20 μl

粗品1~5 μl ：(不超过PCR反应总体积的1/10)

注：此处推荐量为LABLEAD逆转录产物的使用体积，若使用其他品牌逆转录试剂，请根据PCR结果自行调整cDNA体积，防止其抑制PCR扩增。

反应程序1（三步法）：

b.对于普通模板，预变性可缩短至30~60 s；对于复杂模板，例如高GC序列，推荐延长预变性时间到3~5 min以充分变性；大肠杆菌菌落 PCR ：建议将预变性调整10 min，无需预裂解即可高效扩增；酵母菌菌落PCR：无需调整预变性时间，但需要对酵母菌进行预裂解。建议使用以下预裂解方式：向酵母菌中添加终浓度20 mM的NaOH后95℃预裂解10 min，或将酵母菌使用液氮反复冻融2~5次；

c.根据引物Tm值设置退火温度。如引物Tm值≥72℃，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤（两步法PCR）。如果需要，可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性。如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度；

d.对于大多数模板，30 s/kb即可有效扩增；对于一些复杂模板，可延长延伸时间至30~60 s/kb。

反应程序2（两步法）

注. 通常情况下使用两步法和三步法进行 PCR 扩增，性能无显著差异，可以根据操作习惯自行选择。但对于一些复杂模板（如长片段，Tm 分布不均匀 , 特殊结构模板），可以尝试两步法或者Touchdown PCR（降落 PCR）法。此外，使用质粒为模板进行点突变时，也建议使用两步法。

Touchdown PCR（降落PCR）法：

注：该程序仅供参考，Touchdown PCR（降落PCR）有多种程序可灵活调整， 请根据实验需求与习惯自行决定是否采用。

注意事项

1. 请不要使用含尿嘧啶的引物和模板。

2. Lab SuperHiFi hotstart DNA Polymerase具有较强的校正活性，产生的扩增产物是平末端，如果用于下一步克隆实验，建议使用平末端 克隆。如果扩增产物需要用于TA克隆，加A之前须先进行DNA纯化。

3. 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板。