货号：B5105
存储条件：Bradford蛋白浓度测定试剂4ºC保存。蛋白标准-20ºC保存。保质期为1年。
一、背景
Bradford蛋白浓度测定法是基于考马斯亮蓝G250的生物化学特性，其在酸性条件下呈棕红色，最大吸收波长为465nm。当它与蛋白质结合后，变为蓝色，最大吸收波长为595nm。在一定浓度范围内，蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比。通过测定595nm处吸光度的增加量，可以确定与其结合的蛋白质量。蛋白质与考马斯亮蓝结合后，大约在2-5分钟内达到平衡，反应速度快，结合物在室温下可保持稳定至少1小时。
二、产品描述及应用
本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒是一种高效、稳定且高灵敏度的蛋白浓度测定产品，在传统的Bradford法的基础上，我们的试剂盒经过特殊优化，具有以下优势：
1. 快速检测：仅需不到10分钟即可完成10-20个样品的测定，大大缩短了检测时间，提高工作效率。
2. 高灵敏度：最小蛋白检测量可达到0.5μg，能够精确测定低浓度的蛋白样品。
3. 良好的线性关系：我们的试剂盒经过精心优化，确保5μl体积的蛋白样品或标准品在0.1-1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系，从而保证测定数据的准确性和可靠性。（见图1）
图1：BSA蛋白标准品使用本试剂盒的标准曲线图。
此外，与其他蛋白浓度测定方法如BCA法和Lowry相比，Bradford法不受绝大部分样品中的化学物质影响，特别是还原试剂的影响，如β-巯基乙醇和二硫苏糖醇。需注意的是，我们的试剂盒对去垢剂的浓度有一定限制，建议确保待测蛋白样品SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween20、Tween60、Tween80低于0.02%。对于含有高浓度去垢剂的样品，推荐使用我们另外一款产品——Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)。
三、包装清单
Bradford蛋白浓度测定试剂 | 250ml |
蛋白标准(5mg/ml BSA) | 1.5ml |
说明书 | 1份 |
四、注意事项
1. 请在操作前阅读整个使用说明书，并按照说明进行操作。
2. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
3. Bradford蛋白浓度测定试剂从4ºC冰箱取出后请回复到室温再使用。
4. 实验前确保有可检测560-610nm之间波长的酶标仪，最佳检测波长为595nm。
5. 实验前确保有平底96孔酶标板。
6. 试剂盒中的试剂可能对皮肤和眼睛有刺激性，请佩戴适当的个人防护装备（如手套、护目镜）。
7. 所有试剂都应按照实验室的安全操作规程处理。
8. 请勿将试剂或试剂盒的任何部分用于其他目的，以避免污染和交叉反应。
五、实验步骤
1. 蛋白标准品的配置：
根据实验需求配置BSA梯度蛋白标准品。推荐使用待测蛋白的溶解缓冲液，或者使用PBS溶解BSA标准品。以下是一种配置参考，用户可以根据实验需求更改为不同稀释方法和不同浓度：
样品体积 | A | B | C | D | E | F | G |
5mg/ml BSA(μL） | 0 | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 60 |
缓冲液(μL) | 200 | 195 | 190 | 180 | 170 | 160 | 140 |
终浓度(mg/ml) | 0 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | 0.75 | 1 | 1.5 |
2. 蛋白浓度测定：
1) 将各浓度标准品和待测样品分别取5μL加入微孔板中。
2) 在每个孔中加入250μL Bradford蛋白浓度测定试剂，并振荡30秒以充分混合。盖上微孔板，在室温下孵育10分钟。
3) 使用酶标仪测定595nm处的吸光度。也可以在其他575-615nm波长范围内测定吸光度，但相对于595nm，吸光度可能会损失0-10%。
4) 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值作为最终读数），绘制标准曲线（X轴为蛋白浓度；Y轴为最终的OD595nm）。根据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品的蛋白浓度。
