产品货号：0458-1
储存条件：冰袋运输。冻干粉 4℃保存，保持干燥。
产品描述
胰蛋白酶（Trypsin）是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝氨酸蛋白酶，能水解蛋白，以无活性的胰蛋白酶原 （trypsinogen）的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端（二者紧接脯氨酸的情况除外）。 胰蛋白酶包括两个亚基，α亚基（有 2 个多肽链构成）和β亚基（有 1 个多肽链构成）。其水解活性可被多种抑制剂抑制，包 括：1）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯；2）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；3）银离子；4）特定 蛋白酶抑制剂，如 AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK 等； 本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，酶活力> 250 units/mg。广泛用于细胞传代，将贴壁细 胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液，常用的工作浓度是 0.25-5%（w/v）。
产品性质
中文别名（Chinese synonym） | 胰蛋白酶，猪胰脏来源 |
英文别名（English synonym） | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
CAS 号（CAS NO.） | 9002-07-7 |
分子量（Molecular weight） | 23.8 kDa |
外观（Apperance） | 白色至类白色粉末 |
消光系数（Extinction coefficient） | E 1% 280=14.3 |
等电点（Isoelectric Point） | pH 10.5 |
溶解性（Solubility） | 溶于水，几乎不溶于乙醇和甘油 |
比活力（Specific activity）* | ＞250 U/mg |
*活力定义（Unit definition）：The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm.
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换， 1 BAEE U：在 25℃，pH 7.6 的条件下，以 BAEE 为底物，3.2 mL 的反应体系中，A253 吸光值每分钟会发生 0.001 的变 化即为一个胰蛋白酶酶活单位。 1 TAME U：在 25℃，pH 8.2，0.001M 的 Ca 2+的条件下，每分钟水解 1 微摩尔 TAME 的样品量。 1 USP U：在指定条件下，每分钟引起吸光值发生 0.003 的变化的样品活性。 1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
使用方法（用于贴壁细胞的消化）
1.胰酶浓缩液（2.5%）的配置
称取 2.5 g 胰酶粉末溶于 100 mL HBSS（无钙，镁）缓冲液，并调整 pH 在 7.4-7.6 范围。此时得到的即 2.5%胰酶浓缩液， 置于 4℃短时间保存，3 个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会 影响其使用效力。
【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如 PBS。
细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA 溶液，因为 EDTA 是一种 II 价金属离子螯合剂，能够螯 合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶的活性。
2.胰酶-EDTA 溶液的配制：
无 Ca 2+、Mg 2+及酚红的平衡盐溶液 | 485 mL |
胰蛋白酶 | 10 mL (typically a 2.5% w/v solution) |
EDTA | 5 mL of a 2% w/v solution |
3.贴壁细胞的消化
方法一
1）移除培养板中的培养液，用不含 Ca 2+、Mg 2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸除盐溶液。
2）向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA 溶液，至完全覆盖细胞即可。
3）倾斜培养板，吸取胰酶-EDTA 溶液，反复吹洗细胞数次，注意消化时间不可过长。
【注】消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。
4）将细胞于室温孵育直至细胞分离，期间可将细胞培养板置于显微镜下观察，避免细胞过度消化，从而避免胰酶对细胞造 成的损伤。
5）加入 10 mL 细胞培养液，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，吹洗时尽量避免气泡的产生。
6）进行下一步操作或将细胞冻存。
【注】操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。
方法二
以 625px2 T-Flask 为例，
1）无菌条件下吸除培养瓶中培养液。
2）加入 3 mL 冰的胰蛋白酶-EDTA 溶液（配方同上）。
3）孵育 30 s（或更长，如果需要）。置于低倍镜观察，如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁，此时可吸除胰酶溶液，继续 孵育至细胞完全脱落。
4）加入 10 mL 新鲜 MEM 培养液，可用枪快速的将培养液加入，有助于使细胞脱落；然后使用相同的枪头，轻轻地多次吹 洗细胞并混匀后，吸取其中 5 mL 于一个新的培养瓶中。
5）置培养条件下孵育。
本产品仅作科研用途！
