货号:S4680
储存条件:2~8℃
产品说明:
本试剂为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤(仅供参考):
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE浓缩胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表。
灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
2、将不同体积的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 )、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm或距梳齿约12.5px即可)。
5、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
灌制浓缩胶
1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混 合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6、静置,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
注意:
TEMED和10%过硫酸铵溶液最后加,在加入之前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4度有限期为一周,TEMED容易挥发,使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固,如温度过低,可放37度温箱凝固。灌完分离胶后,轻轻的加1ml ddH2O封上层,凝固后可见到分界线。灌浓缩胶时先倾去水层。灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后,放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔),轻轻拔出梳子。
附表
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶
分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150kd |
8%胶 | 30-90kd |
10%胶 | 20-80kd |
12%胶 | 12-60kd |
15%胶 | 10-40kd |
关于SDS-PAGE胶的配制,请参考
试剂 | 分离胶6% | 分离胶8% | 分离胶10% | 分离胶12% | 浓缩胶4% |
配制量 | 10ml | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
30%丙烯酰胺 | 2.0ml | 2.7ml | 3.3ml | 4.0ml | 0.67ml |
4×分离胶缓冲液 | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | — |
4×浓缩胶缓冲液 | --- | — | — | — | 1.25ml |
ddH2O | 5.4ml | 4.7ml | 4.1ml | 3.4ml | 3.025ml |
TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 5ul |
10%过硫酸铵 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |