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  • 4xSDS浓缩胶缓冲液pH6.8(货号:S4680)
  • 4xSDS浓缩胶缓冲液pH6.8(货号:S4680)

    • ¥63.00
      ¥63.00
CAS:

货号:S4680

储存条件:2~8℃

产品说明:

本试剂为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤(仅供参考):

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE浓缩胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表。

灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表)

1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。  

2、将不同体积的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 )、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。

3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm或距梳齿约12.5px即可)。

5、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。

灌制浓缩胶

1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。  

2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混  合。  

3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

6、静置,等待浓缩胶聚合。  

7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。

8、进行常规电泳操作。

注意:

TEMED和10%过硫酸铵溶液最后加,在加入之前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4度有限期为一周,TEMED容易挥发,使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固,如温度过低,可放37度温箱凝固。灌完分离胶后,轻轻的加1ml ddH2O封上层,凝固后可见到分界线。灌浓缩胶时先倾去水层。灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后,放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔),轻轻拔出梳子。

附表

根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶

分离胶浓度

最佳分离范围

6%胶

50-150kd

8%胶

30-90kd

10%胶

20-80kd

12%胶

12-60kd

15%胶

10-40kd

关于SDS-PAGE胶的配制,请参考

试剂

分离胶6%

分离胶8%

分离胶10%

分离胶12%

浓缩胶4%

配制量

10ml

10ml

10ml

10ml

5ml

30%丙烯酰胺

2.0ml

2.7ml

3.3ml

4.0ml

0.67ml

4×分离胶缓冲液

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

4×浓缩胶缓冲液

---

1.25ml

ddH2O

5.4ml

4.7ml

4.1ml

3.4ml

3.025ml

TEMED

10ul

10ul

10ul

10ul

5ul

10%过硫酸铵

100ul

100ul

100ul

100ul

50ul


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