货号：P1027-20T

存储条件：常温，6个月有效

产品简介：

蛋白快速银染试剂盒是一种快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优点还在于：①操作简单快速；②用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；③目的条带清晰：④不含甲醇。

蛋白快速银染试剂盒操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.水平摇床或侧摆摇床

2.去离子水（超纯）

3.乙醇、冰乙酸

操作步骤(仅供参考)：

1. 准备工作

以下操作以 8.5x137.5px、 厚度为 1.0mm 的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是 25mL，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在 60-70rpm。提前配制固定液，即按无水乙醇：冰乙酸：去离子水=5：1：4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇：去离子水=1:4的比例配制。

2. 水洗

电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min.

3. 固定

取凝胶放入50-100ml 固定液中，在摇床上室温摇动 15-20min，重复固定步骤1次。

4. 洗脱

取凝胶放入洗涤液中清洗2 次，每次 5min。

5. 水洗

去离子水清洗凝胶2次，每次 5min。

6. 增敏

配制银染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1mL 加入到 50mL去离子水中，混匀，即为 1×Silver Stain Sensitizer，一般应 2h 内用完。室温下用 1xSilver Stain Sensitizer 孵育凝胶 2min，立即用去离子水清洗凝胶2次，每次1min。

7. 银染

配制银染工作液，即取Silver Stain(100 x)0.5mL 加入到50mL 去离子水中，混匀，即得 1× Silver Stain，一般应 2h 内用完。 将凝胶放入 1 xSilver Stain， 在摇床上室温摇动 10-20min。

8. 水洗

弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 30s， 摇动速度在 60-70rpm总的水洗时间应控制在 1.5min 内。

9. 显影

配制银染显影工作液，即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去离子水中，混匀，即为 1x Silver Stain Developer，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于 1x Silver Stain Developer 中，室温孵育2-10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影 2-3min， 亦可延长至 5min 以上，如果显影效果不佳，可重新更换 1xSilver Stain Developer继续显影。

10. 终止

迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上摇动 10min，以终止显色反应。（配制银染终止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10x)10mL加入到 90mL 去离子水中，混匀，即为 1x Silver Stain Stop Buffer，一般应 24h 内用完。)

11. 保存

弃终止液，加入去离子水50mL，摇床上摇动2-5min，弃液。短期保存于新鲜去离子水，长期保存可制备干胶。

注意事项

1.背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分；③凝胶中残留物质未去除干净；④去离子水的纯度过低

2.蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低；②银染后水洗时间过长；③蛋白量较低；④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。

3.凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分漫没，应加入足量溶液；②容器没有清洗干净；③凝胶接触金属物质；④指纹或其他压迹。