产品编号 | 产品名称 | 包装 |
E1060 | ECL超敏发光液 | 50ml*2 |
保存条件: 4℃避光保存,一年有效。如果长期不用,可以-20℃保存。-20℃可以保存更长时间。
产品简介
用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。具有以下特点:
(1) 具有极高灵敏度和高信噪比,可检测至低皮克(pg)水平;
(2) 可在日光灯下进行发光操作;
(3) 发光迅速,荧光可使X光胶片感光达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测,淬灭时间长;
(4) 可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000),极其节省抗体;
(5) 保存时间长;
使用说明:
常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用 HRP 标记 IgG 或用一抗-链亲和素 -生物素-HRP 夹心法。核酸杂交膜用 HRP 标记探针杂交,洗膜。
1、在最后一次洗涤膜上的 HRP 标记二抗的同时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液 A 和 B 混合,放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
2、用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液充分接触(约 0.125ml 发光工作液/cm2 膜)。室温孵育 3 分钟后,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利于反应进行,也会导致膜上 条带曝光不均匀和灵敏度明显降低。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
3、用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
4、在 X 光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包 裹杂交膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内,最好蛋白带面向上。
5、在黑暗中放入 X 感光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
注意事项:
1. 步骤 1-5 可在日光灯下操作;但发光液暴露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的洁净。
2. 长时间曝光或蛋白质过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
3. 发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光 较弱,肉眼虽不可见但能使 X 胶片曝光。不能单凭肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上 可持续数小时并使 X 胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜, 重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和曝光。
4. 由于超敏发光液的高灵敏度,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000-1:4000,二抗 1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败!
5. 某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜,例如“克林莱”牌保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可帮助确定胶片上条带的准确位置 和大小。
7. NaN3 能抑制 HRP 活性,回收二抗时应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。
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