产品货号:Q15130、S15120、C15160、D15170
储存条件:2~30°C下20%⼄醇中保存(4°C下有利于⻓期保存)
1.产品描述
离⼦交换层析是⽬前在蛋⽩质分离纯化中应⽤最⼴泛的⽅法之⼀,是根据其表⾯电荷(类型、数量及分布)的差异分离不同⽣物分⼦的过程。应市场需求,兰博利德⽣物⾃主研发⽣产的离⼦交换层析介质分为琼脂糖系列及⾼分⼦聚合物系列。 LABLEAD 6FF系列离⼦交换层析介质以⾼度交联的琼脂糖为基质,以SP/Q/CM/DEAE为配基,具有⾼流速,低反压,⾼载量的特点,能很好的⽤于重组蛋⽩、抗体、核酸、病毒及类病毒。
2.产品性质
参数 | 指标 | |
基质 | 6%交联琼脂糖凝胶 | |
功能载量 | SP | 164mg 溶菌酶/mLwet gel |
Q | 83mg BSA/mLwet gel | |
CM | 75mg溶菌酶/mLwet gel | |
DEAE | 73mg BSA/mLwet gel | |
粒径 | 45um~165um | |
推荐流速 | 60~7500px/h(根据柱子规格选择合适流速) | |
最高耐压 | 0.3MPa | |
pH稳定性 | 3~13(长期)2~12(短期) |
3.操作步骤
Chremrose ® FF离⼦交换层析可以在实验室被填装到中压层析柱中,以扩⼤产量。将填料填装到层析柱中,根据样本量 和填料载量选择合适的层析柱和柱⾼。
3.1 缓冲液准备
平衡缓冲液:20 mMPB, pH7.0
洗脱缓冲液:20 mMPB+1MNaCl, pH7.0
以阳离子交换层析介质为例
3.2 样品准备 为了避免堵塞层析柱,样品应经离⼼或微滤(0.45μm)处理。
3.3 样品纯化
1) 平衡:⽤5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱,⾄流出液电导和pH不变(与平衡液⼀致)。
2) 进样:样品缓冲液应尽可能与平衡液⼀致。固体样品可⽤平衡液溶解配制,低浓度样品溶液可⽤平衡液透析或添加相应量的盐;⾼浓度样品溶液可⽤平衡液稀释。
3) 淋洗:继续⽤平衡缓冲液淋洗⾄基线。
4) 洗脱:⽤洗脱缓冲液(也可采⽤pH梯度洗脱)洗脱(可采⽤线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱),收集流出液。
5) 再生:每次层析之后可⽤1~2M NaCl清洗层析柱,除去强结合的蛋⽩。
重要提示:如果使⽤Xtrap预装柱,可省略装柱步骤。
4清洗和保存
4.1 原位清洗
介质使⽤数次(具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进⾏在位清洗。
1) 对 于 通 过 离 ⼦ 键 强 结 合 的 蛋 ⽩,可 ⽤2 M N a C l以1 - 2mL/min的流速反向冲洗10~15min。
2) 对沉淀蛋⽩、疏⽔性结合的蛋⽩、脂蛋⽩,可⽤1M NaOH以1~2mL/min的流速反向冲洗3~4CV。
3) 对强疏⽔性结合的蛋⽩、脂蛋⽩和脂类物质,可⽤70%⼄醇或30%异丙醇以1~2mL/min的流速反向冲洗3~4CV(使⽤⾼浓度的有机溶剂时,为了避免产⽣⽓泡,应采⽤逐步增加有机溶剂浓度的⽅法)。
4.2 储 存
2~30°C下20%⼄醇中保存(4°C下有利于⻓期保存);层析柱中的介质可⽤20%的⼄醇冲洗后保存⼲2~30°C。
注:在装柱、使⽤和保存柱⼦的时候,要避免柱⼦流⼲或密封不严,防⽌⽓泡进⼊。
SP beads 6FF 动态载量的测定
介 质:SP Chromrose FF层析介质
样 品:溶菌酶(缓冲液A溶解)
结合缓冲液:0.1MPB溶液PH 6.4
洗脱缓冲液:0.1MPB溶液+1M氯化钠溶液pH 6.4
流 速:上样0.2mL/min保留时间5分钟 其他1mL/min
Q beads 6FF 动态载量的测定
介 质:Q Chromrose FF层析介质
样 品:BSA溶液(缓冲液A溶解)
结合缓冲液:0.1M碳酸钠-碳酸氢钠溶液pH 9.2
洗脱缓冲液:0.1M碳酸钠-碳酸氢钠, 1M氯化钠溶液pH 9.2
流 速:上样0.2mL/min保留时间5分钟,其他1mL/min
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本品仅用于实验研究。