货号：IP001

保存条件：-20℃保存，一年有效。

此试剂盒配合GFP-Nanoab-Agarose/Magnetic Beads、RFP-Nanoab-Agarose/ Magnetic Beads、Myc-Nanoab-Agarose/ Magnetic Beads、HA-Nanoab-Agarose/ Magnetic Beads等产品使用。用于IP/Co-IP实验。

试剂盒组分：

溶液 A 裂解液 A 30 ml

溶液 B 裂解液 B 30 ml

溶液 C 漂洗液 C 30 ml

溶液 D 漂洗液 D 30 ml

溶液 E 洗脱液 E 3x 1 mL

产品组分

A组分：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，odium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂；

B组分：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，EDTA，leupeptin等多种抑制剂；

C组分：50mM tris  PH7.5  150mM NaCl，0.1% Triton X100，1m M  EDTA；

D组分：50mM tris  PH7.5  500mM NaCl，0.1% Triton X100，1m M  EDTA。

注意事项：

1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 关于溶液的选择，温和裂解液选A强裂解液选B，低盐漂洗液选C，高盐漂洗液选D；第一次使用，细胞组织材料可根据目的蛋白定位，选择使用裂解液A或者B；植物组织材料用裂解液B，漂洗液首选溶液C。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

实验步骤： 提示：尽量在 4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。

1. 收集细胞：根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用106-107个细胞。

2. 裂解细胞：根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl 预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；4℃，20,000g 离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。

3. 平衡珠子：振荡充分混匀珠子，吸取20μl珠子到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。

4. 结合蛋白：将平衡好的珠子加入到细胞裂解产物中，于 4℃旋转混合结合 30min-1h。

5. 清洗珠子：根据实验要求选择使用溶液 C 或溶液 D 清洗珠子。4℃，2,500g 离心 2 分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。用 500μl 预冷的溶液 C 或溶液 D 重悬珠子，4℃，2,500g 条件下离心 2 分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液并重复洗涤 3 次。

6. 洗脱蛋白

方法一：

        加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬珠子。95℃，加热10min充分变性，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。

方法二：

        加入溶液E 50ul 洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，2,500g 离心2分钟或利用磁性分离收集上清，为了中和酸性的甘氨酸，需加入 5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。