货号：F3509S

储存条件：-20℃

同裂酶： BsuRI, BshFI, BspANI, BsnI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

LabFD™Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。LabFD™Color Buffer的红色染料与2500 bp 双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10 bp双链 DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

建议反应条件

1×LabFD™缓冲液；

37℃温育；

参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育20min。

质量控制

功能活性检测

37℃下，在20ul通用LabFD™反应体系中，1ul LabFD™HaeIII能够在15min内完全消化1ug λDNA。 

超长时间温育检测

37℃下，在 20 μl 通用LabFD™反应体系中，将1μl LabFD™ HaeIII与1μg λDNA 共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活 性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用 10 倍酶量的 LabFD™HaeIII消化 DNA 底物， 回收酶切产物，在22℃下使用T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切 酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a注：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR具备一定的离子强度，10xLabFD^TMbuffer加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

3) 37℃温育15min（质粒），或15~30min（PCR产物），或30~60min（基因组DNA），不建议长时间酶切；

4) 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。

5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。

DNA 修饰酶在 LabFDTM Buffer 和 LabFDTM Color Buffer 中的活性

注：活性数据来自lablead标准反应体系下的检测；T4 DNA Ligase(Fast) 需要 ATP 作为辅助因子。