货号：T0125
储运条件 ：-20℃
产品组成
组分 | 规格 | 规格 |
High T7 RNA Polymerase(50 U/ul) | 5000 u | 25000 u |
10×T7 RNA Polymerase Buffer | 1.25 ml | 1.25 ml |
产品简介
本产品是经基因工程改造的热稳定T7 RNA聚合酶，对噬菌体T7启动子序列具有高度特异性，跟野生型噬菌体T7 RNA聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。High T7 RNA Polymerase可在37~52℃条件下进行高效的体外转录。
活性定义
1活性单位(U)是指在50℃ 1 h内使1 nmol ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
适用范围
1. 合成单链RNA,包括mRNA,siRNA, gRNA等各类RNA的前体。
2. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。
3. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。
质量控制
蛋白纯度检测
本品经SDS-PAGE检测纯度≥95%。
核酸内切酶残留检测
将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
DNase残留检测
将酶液与双链DNA 底物在 37℃温育16 h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
RNase残留检测
将酶液与RNA在 37℃温育 1 h，通过电泳检测RNA无降解。
功能检测
体外转录合成实验，通过RNA电泳可以检测到目的条带。
使用方法 (推荐反应体系（20 μl）)
试剂 | 体积 | 终浓度 |
10×T7 RNA Polymerase Buffer | 2 μl | 1× |
CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each) | 0.1~0.4 μl each | 0.5~2 mM each |
RNase Inhibitor (40 U/μl) | 0.5~1 μl | 1~2 U/μl |
Template DNA | 0.1-1 μg | - |
High T7 RNA Polymerase(50 U/μl) | 1-2 μl | - |
Nuclease-Free Water | Up to 20 μl | - |
注:建议加完Nuclease-Free Water，再加CTP/GTP/ATP/UTP。在 20 μL 反应体系中加入 0.02 U 热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
推荐反应条件
50℃反应 1 h。
反应结束后，可向上述 20μl 反应液中加入1μl dsDNase，37℃孵育15 min用于去除DNA模板。
注意事项
1. 模板 DNA 的纯度对体外转录反应至关重要。质粒DNA抽提过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280为1.8~2.0的高纯度 RNase-free 质粒。
2. 模板DNA可通过线性化环状质粒或PCR 获得。模板DNA上游需含有T7启动子序列，下游为平末端或编码链5' 末端突出。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
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