SYBR Green I 核酸染料特点

● 无毒性：属花箐类染料，容易生物降解，无致癌毒性。

● 灵敏度高：至少可检出 20pg DNA，高于EB染色法20～30倍。

● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

● 操作简单：无须脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。

● 适用范围广：可适用于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。

● 使用方便：对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用。

● 经济：价格比银染便宜。

● Ex(nm)# 497 Em(nm)# 520

SYBR Green I 使用方法简介

1. 胶染法（用法同 EB）（推荐方法）

1) 制胶时加入 SYBR Green I 核酸染料。冷却胶至 50℃左右，每 100mL 胶中加入 3～5μL SYBR Green I 核酸染料。

2) 按照常规方法进行电泳即可。

注：此方法染色可以准确确定核酸片段分子量，染料用量相对较少。1ml 染料大约可以做 300 块 100mL 的胶。

2. 点染法

1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。

2) 工作液的配制：用电泳缓冲液将 10000×的 SYBR Green I 稀释 100 倍，即为 SYBR Green I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置 2～8℃保存一个月以上。

3) 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

4) 样品染色：向分析样品中加入 SYBR Green I 工作液和载样缓冲液，室温放置 10 分钟，使 SYBR Green I 与样品中 DNA 充分结合。SYBR Green I 工作液加入量为总上样量的 1/5～ 1/10。

5) DNA Marker 染色：将 5μL DNA Marker、5μL DNA Marker 稀释液和 1μLSYBR Green I 工作液混匀，室温放置 5 分钟，使 SYBR Green I 与 DNA 充分结合。

6) 上样、电泳：按常规操作。

注：用点染法染色时，灵敏度最高，染料用量最少。但大片段稍有滞后现象，如果需要更准确确定分子量

（与 Marker 对比），建议使用胶染法。

3. 泡染法

1) 按照常规方法进行电泳。

2) 用 pH 7.0～8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照 10000﹕1 的比例稀释 SYBR Green I 浓缩液，混匀，制成染色溶液。

3) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色 10～30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆盖整个胶板，并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

注：用泡染法染色时，可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。