CAS:
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货号：R2000
储存条件：－20 ℃保存，避免起泡，避免剧烈振荡或搅拌。
产品描述
本制品是经过大肠杆菌表达的重组蛋白，与RNase A形成1：1复合体，对RNase 表现高度的非竞争性抑制（Ki=3×10-10 M）。该反应是可逆的，通过尿素及疏基类试剂能够解离复合体，使RNase 复活而抑制剂不可逆失活。本品属蛋白质性质，与其它竞争性抑制剂（核酸类、无机磷酸类）不同，可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去。
活性定义
抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1、按照一下体系添加各组分
Components | Volume |
Total RNA/mRNA | 50 ng-5 μg/5-500 ng |
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or | 1 μl |
Random Primer(0.1 μg/μl) or | 1 μl |
GSP(Gene Specific Primer) | 2 pmol |
dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
5× RT Buffer | 4 μl |
RNase Inhibitor(40 units/μl) | 0.5 - 1 μl |
m-MLVe | 1 μl |
RNase free H2O to final volume | 20 μl |
2、轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育50 min。
3.70℃加热5 min失活m-MLVe。
RT-PCR
反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于-20°C。
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