货号:P4001
存储条件:储存液 在4 ºC保存,有效期至少3个月。
产品简介
操作流程(以6孔板为例)
1.细胞铺板
提前一天将细胞种植在六孔板中,以转染时细胞密度在70%~80%为宜。
2.转染过程
1)在转染前2h,移除细胞上原有的培养基,换为新鲜的完全培养基。
2)将2ug质粒DNA用50uL无血清稀释液稀释,充分混匀制成DNA稀释液。
注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O
3)向DNA稀释液中直接加入4uL转染试剂,室温静置10~15min。转染复合物配制完成。
4)将转染复合物加入细胞培养基中,轻柔混匀。
5)继续培养24~48h,收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。
6)使用本产品转染后一般在24h开始进入表达高峰期,36~48h达到表达高峰,相对于脂质体转染试剂,达到峰值的时间延后约6~12h。
不同细胞培养容器转染用量:
细胞培养容器 | 表面积 | 稀释液体积 | DNA的量 | 转染试剂的量 | 培养基总量 |
96-well | 7.5px2 | 10uL | 0.1ug | 0.1uL | 100uL |
48-well | 17.5px2 | 20uL | 0.2ug | 0.3uL | 200uL |
24-well | 47.5px2 | 50uL | 0.5ug | 1uL | 500uL |
12-well | 95px2 | 50uL | 1ug | 2uL | 1mL |
6-well/35mmdish | 250px2 | 100uL | 2ug | 4uL | 2mL |
60mm dish/T25flask | 525px2 | 200uL | 4ug | 8uL | 4mL |
100mm dish/T75flask | 1450px2 | 500uL | 10ug | 20uL | 10mL |
注意事项
1、对大多数细胞来而言,每1μg DNA 使用3.0μL PEI MAX转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1μg DNA使用 1.5~4 μL体积线性PEI 40000转染试剂进行优化。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。
3、本产品仅用于科研用途,不可用于人体。