您好,欢迎来到兰博利德
二开
400-6869-840   /   010-60608020
  • 盐酸嘌呤霉素(货号:P067)
  • 盐酸嘌呤霉素(货号:P067)

    CAS:58-58-2
    • ¥0.00
      ¥0.00
CAS:
CAS:58-58-2

产品货号:P067

储存条件:-20℃保存

产品描述

盐酸嘌呤霉素PPuromycin dihydrochloride (CL13900 dihydrochloride) 是一种氨基核苷类抗生素,抑制蛋白合成 (protein synthesis)。

产品性质

中文别名 (Chinese Synonym)

二氢氯化嘌呤毒素

英文别名 (English synonym)

Puromycin dihydrochloride

CAS 号 (CAS NO.)

58-58-2

分子式 (Formula)

C22H29N7O5·2HCl

分子量 (Molecular weight)

544.44

纯度 (Purity)

>98%

溶解性(solubility)

H2O 

50  mg/mL  (91.84  mM;  Need  ultrasonic  and  warming)

DMSO

50  mg/mL  (91.84  mM;  Need  ultrasonic)

Ethanol

5  mg/mL  (9.18  mM;  ultrasonic  and  warming  and  heat  to  60°C)


使用方法 
   

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定。

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125 μg/mL。

【注】:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身的影响。

2. 溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液,经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/mL的储存液。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。

(1)Day 1:24孔板内以5~8×104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。

(2)Day 2:①准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15 μg/mL,至少5个梯度);②往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37℃孵育细胞。

(3)Day 4:更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。

(4)根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基。

(5)每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后,细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖,以筛选出稳定转染子。

(1)细胞转染48 h后,将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

【注】:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

(2)每隔2-3天,移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

(3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。

【注】:每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

(4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

(1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

(2)本品仅用于实验研究。


400-6869-840
客服电话
010-6060-8020
联系电话
PRODUCT CENTER
产品中心

您好,欢迎访问北京兰博利德官网