货号：MR0201

储存温度：-20^。C，避光保存至少6个月，使用前充分混匀

产品组分

制品说明

miRNA荧光定量PCR检测试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。

注：该试剂盒须与miRNA第一链合成试剂盒（MF0201）配套使用。

需自备试剂：

1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶）

2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward primer设计原则

1. 遵循引物设计的最普通原则

2. 以成熟的miRNA序列为基础，将U替代为T，

3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm值为65^。C

4. 若按照原则2中的方式直接设计的引物其Tm值过低，可以在引物的5^，端添加几个碱基（最好为G或C碱基）；也可以在3’端加1个或者几个A碱基；或者在5’端和3’端同时修饰；

5. 若按照原则2中的方式直接设计的引物其Tm值过高，可以在引物5’端或3’端去掉几个碱基。

注意事项：

1. miRNA第一链cDNA的加入量不要超过Real time PCR体积的1/10

2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增，根据所检测的miRNA的丰度适当的稀释cDNA(10倍或100倍)

3. 本品种含有荧光染料SYBR Green I，保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

4. 2 x miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户可根据qPCR仪器指导决定是否加ROX，用于消除信号本底以及矫正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

操作步骤

1. 在室温融化2x miRNA qPCR Mix(with SYBR Green)和Reverse primer(10uM)。 

2. 使用时请将2x miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免气泡，并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降（请不要使用振荡器混匀）。

3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制

PCR循环（三步法）

PCR循环（两步法）

注：提高特异性选择两步法，提高扩增效率选择三步法。