货号：F4503S

储存条件：-20℃，有效期2年

同裂酶：AfaI, Csp6I, CviQI, RsaNI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LabFD™快速内切酶在通用的LabFD™或LabFD™Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5~15分钟内完成酶切。此外，兰博利德去磷酸化、连接试剂在LabFD™Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。LabFD™ColorBuffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。LabFD™ColorBuffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

建议反应条件：1×LabFD™缓冲液；37℃温育；参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件：80℃温育20min。

质量控制

功能活性检测

最适反应温度下，在20ul反应体系中，1ulLabFD™RsaI能够在15min内完全消化1ug λDNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下，将1ulLabFD™RsaI与1ug λDNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用10倍酶量的LabFD™RsaI消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用T4 DNA Ligase(Fast)可以将超过90%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开95%以上的连接产物。

使用方法

1.DNA快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系： 

a.本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×LabFD™Buffer加入量可适当减少至2μl。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）37℃温育15min（质粒），或15~30min（PCR产物），或30~60min（基因组DNA）；

（4）80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。

（5）如果使用LabFD™ColorBuffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2.双酶切或多酶切

（1）每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

（2）所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

（3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。